河流弧菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 河流弧菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Vibrio fluvialis Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR4525 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于染料法熒光定量PCR技術(shù)，專用于快速、高靈敏度檢測(cè)河流弧菌（Vibrio fluvialis）的核酸。適用于科研領(lǐng)域，如環(huán)境樣本、臨床標(biāo)本或食品微生物檢測(cè)中的河流弧菌篩查。
產(chǎn)品組成
預(yù)混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及熒光染料（如SYBR Green）
引物對(duì)：特異性擴(kuò)增河流弧菌靶基因序列
陽(yáng)性對(duì)照：河流弧菌標(biāo)準(zhǔn)DNA模板
陰性對(duì)照：無(wú)核酸酶水
使用說(shuō)明書
技術(shù)參數(shù)
檢測(cè)靶標(biāo)：河流弧菌特異性基因（如16S rRNA或毒力基因）
靈敏度：可檢測(cè)低至10拷貝/μL的核酸
特異性：與近源弧菌（如霍亂弧菌、副溶血弧菌）無(wú)交叉反應(yīng)
反應(yīng)體系：50 μL/反應(yīng)（推薦）
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 樣本處理
DNA提取：使用商用DNA提取試劑盒或酚-氯仿法從樣本（如糞便、水體）中提取核酸。
模板稀釋：建議將DNA稀釋至1–100 ng/μL，避免PCR抑制物干擾。
2. PCR反應(yīng)體系配置
在冰上按以下比例配制反應(yīng)混合液（以單次反應(yīng)為例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 預(yù)混液（2×） | 25 |
| 正向引物（10 μM） | 1 |
| 反向引物（10 μM） | 1 |
| DNA模板 | 2–5 |
| 無(wú)核酸酶水 | 補(bǔ)足至50 |
注意事項(xiàng)：
避免反復(fù)凍融試劑，解凍后需渦旋混勻并短暫離心。
每批次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照（無(wú)模板）和陽(yáng)性對(duì)照。
3. PCR擴(kuò)增程序
按以下參數(shù)設(shè)置熒光定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃, 5 min
循環(huán)階段（40個(gè)循環(huán)）：
變性：95℃, 30 sec
退火：58℃, 30 sec（溫度需根據(jù)引物Tm值優(yōu)化）
延伸：72℃, 30 sec
熔解曲線分析：72℃→95℃，每0.5℃采集熒光信號(hào)，驗(yàn)證擴(kuò)增特異性。
數(shù)據(jù)分析
閾值設(shè)定：儀器軟件自動(dòng)或手動(dòng)設(shè)定熒光信號(hào)閾值。
Ct值解讀：Ct值≤35視為陽(yáng)性，>35需結(jié)合熔解曲線判斷（非特異性擴(kuò)增需排除）。
質(zhì)量控制
陰性對(duì)照：應(yīng)無(wú)擴(kuò)增曲線（Ct值=Undetected）。
陽(yáng)性對(duì)照：Ct值需在預(yù)期范圍內(nèi)（如15–25）。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)需在無(wú)菌環(huán)境下操作，避免氣溶膠污染。
試劑解凍后應(yīng)置于冰上，使用后立即放回-20℃。
本產(chǎn)品僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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