回歸熱疏螺旋體(回歸熱包柔螺旋體)染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 回歸熱疏螺旋體(回歸熱包柔螺旋體)染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Borrelia recurrentis Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4538 |
性能特點
即開即用:用戶僅需提供DNA模板,操作便捷。
高特異性:引物基于回歸熱疏螺旋體保守區(qū)設(shè)計,避免交叉反應。
高靈敏度:熒光定量PCR技術(shù)檢測限低,優(yōu)于常規(guī)PCR。
閉管操作:一管式設(shè)計減少污染風險。
雙重功能:支持定性與定量檢測,定量線性范圍達5個數(shù)量級。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/包裝 | 備注 |
| 2×qPCR Magic Mix | 500 μL(棕色管) | 含熒光染料與聚合酶 |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) | 用于標準品稀釋 |
| qPCR引物混合液 | 100 μL(白蓋) | 特異性引物與探針 |
| 陽性對照(1×10^8拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) | 非活體DNA片段 |
| 說明書 | 1份 | 含操作流程與參數(shù)設(shè)置 |
操作步驟
1. 陽性對照稀釋(示例:10^2~10^7拷貝/μL)
在獨立區(qū)域進行,避免污染。
取6管,分別加入45 μL稀釋液,梯度稀釋陽性對照(5 μL原液+45 μL稀釋液,依次10倍稀釋)。
2. PCR反應體系(20 μL/反應)
| 組分 | 體積(μL) |
| 2×qPCR Magic Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 超純水 | 6 |
3. 反應程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
| 變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb| |
| 終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
注:退火溫度需根據(jù)引物Tm值調(diào)整(建議低于理論值2-5℃)。
常見問題與解決
無擴增條帶:檢查試劑活性(避免反復凍融)、優(yōu)化退火溫度或重新設(shè)計引物。
弱擴增信號:確保模板質(zhì)量,避免稀釋液過量。
假陽性:操作時分區(qū)進行,避免交叉污染。
注意事項
試劑需避光保存,避免反復凍融。
陽性對照為DNA片段,不可用于活體實驗。
具體參數(shù)可能因儀器型號調(diào)整,建議預實驗優(yōu)化條件。
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關(guān)鍵字: 回歸熱疏螺旋體(回歸熱包柔螺旋體);染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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