檢驗(yàn)原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)變異鏈球菌（Streptococcus mutans）基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物。通過熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)DNA的定性和定量檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 變異鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus mutans Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4391 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度：優(yōu)化的引物設(shè)計(jì)可檢測(cè)低至10^2拷貝/μL的靶標(biāo)核酸。
特異性強(qiáng)：引物經(jīng)嚴(yán)格驗(yàn)證，不與相近菌種或宿主DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混反應(yīng)體系包含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液及熒光染料，用戶僅需提供模板DNA。
雙重質(zhì)控：提供陽性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品DNA片段）和陰性對(duì)照（無模板對(duì)照，NTC），確保結(jié)果可靠性。
寬動(dòng)態(tài)范圍：定量線性范圍覆蓋10^2–10^7拷貝/μL，適用于絕對(duì)定量分析。
操作流程
樣本處理
口腔樣本：采集齦緣菌斑或唾液，使用DNA提取試劑盒分離核酸。
其他樣本：血液、組織等需按標(biāo)準(zhǔn)方法提取DNA，建議OD260/280比值1.8–2.0。
試劑準(zhǔn)備
解凍預(yù)混液于冰上，輕柔混勻后瞬時(shí)離心，避免氣泡。
按需稀釋陽性對(duì)照（10倍梯度稀釋，建議6個(gè)濃度點(diǎn)）。
反應(yīng)體系配置（20 μL/孔）
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× SYBR Premix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| RNase-free H?O | 6 |
PCR程序設(shè)置
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）
熔解曲線分析：60–95℃，每0.5℃遞增
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作：模板添加與擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行，避免污染。
技術(shù)重復(fù)：建議每組樣本設(shè)3個(gè)復(fù)孔，提高數(shù)據(jù)可靠性。
熔解曲線驗(yàn)證：單一峰值表明擴(kuò)增特異性，多峰需排除引物二聚體或污染。
儲(chǔ)存與有效期
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
有效期：12個(gè)月。
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關(guān)鍵字： 變異鏈球菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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