技術原理

采用SYBR Green染料法,通過實時監(jiān)測雙鏈DNA結合染料的熒光信號,定量檢測犬鏈球菌特異性DNA片段。引物針對Streptococcus canis保守序列設計,確保高特異性。
產(chǎn)品名稱 | 犬鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus canis Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4395 |

產(chǎn)品特點

即開即用:預混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、酶等),僅需提供樣品DNA模板。
高靈敏度:檢測下限可達100拷貝/反應,線性范圍≥5個數(shù)量級(10^1-10^6拷貝/μL)。
質控保障:含無傳染性陽性對照DNA片段(濃度1×10^8拷貝/μL),避免假陰性。
兼容性:適用于ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流熒光定量PCR儀。
操作步驟

1. 標準曲線制備(以6個10倍稀釋梯度為例):
標記離心管(6-1號),每管加45μL專用稀釋液。
取5μL陽性對照(1×10^8拷貝/μL)加入6號管,震蕩混勻得1×10^7拷貝/μL標準品,依次稀釋至1×10^2拷貝/μL。
2. PCR反應體系(示例):
| 組分 | 體積(μL) |
| 2× qPCR Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| ddH?O | 6 |
3. 程序設置:
預變性:95℃ 5min
循環(huán):95℃ 10s → 60℃ 30s(40循環(huán),采集熒光)
熔解曲線分析:60℃-95℃,升溫速率0.5℃/s
注意事項

標準品稀釋需在獨立區(qū)域操作,避免交叉污染。
建議使用帶濾芯槍頭,所有離心管/板應無菌無DNA酶。
熔解曲線需呈現(xiàn)單一峰形,否則可能存在非特異性擴增。
結果判讀
定性:Ct值≤35且熔解曲線符合預期判為陽性。
定量:根據(jù)標準曲線計算樣品拷貝數(shù)。
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關鍵字: 犬鏈球菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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