檢驗(yàn)原理
本試劑盒采用SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)停乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）的基因高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，通過熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增過程，實(shí)現(xiàn)定性及定量檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 停乳鏈球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Streptococcus dysgalactiae Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4400 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度：優(yōu)化的引物設(shè)計(jì)，可檢測(cè)低拷貝數(shù)目標(biāo)基因。
高特異性：引物針對(duì)停乳鏈球菌特有序列，避免交叉反應(yīng)。
即開即用：用戶僅需提供待測(cè)DNA模板，操作簡便。
雙重檢測(cè)模式：支持定性和定量分析，定量線性范圍達(dá)5個(gè)數(shù)量級(jí)。
內(nèi)置對(duì)照：提供陽性對(duì)照，便于排除假陰性干擾。
操作流程
樣本準(zhǔn)備
臨床樣本（如血液、分泌物、組織等）：
血液樣本：采集2 mL靜脈血，EDTA抗凝，混勻后提取DNA。
病灶樣本：無菌采集滲出物或膿液，提取核酸。
食品/環(huán)境樣本：按微生物檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)預(yù)處理后提取DNA。
試劑配制
解凍與混勻：
從-20℃取出試劑，冰上解凍5-10分鐘。
輕緩顛倒混勻，避免氣泡，短暫離心（1000 rpm，10秒）。
反應(yīng)體系配置（20 μL/反應(yīng)）：
預(yù)混液10 μL + 引物2 μL + 模板DNA 2 μL + RNase-free水6 μL。
建議設(shè)置3次技術(shù)重復(fù)及陰性對(duì)照（NTC）。
PCR擴(kuò)增程序
預(yù)變性：95℃ 5分鐘。
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（熒光采集）。
熔解曲線分析：60℃~95℃，0.5℃/步，驗(yàn)證擴(kuò)增特異性。
結(jié)果判讀
定性檢測(cè)：Ct值≤35且熔解曲線單一峰判為陽性。
定量檢測(cè)：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算模板拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作，避免氣溶膠污染。
陽性對(duì)照需獨(dú)立稀釋，防止污染其他組分。
熔解曲線異?？赡芴崾痉翘禺愋詳U(kuò)增，需復(fù)核引物設(shè)計(jì)或樣本純度。
儲(chǔ)存與有效期
-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
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關(guān)鍵字： 停乳鏈球菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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