預(yù)期用途
本試劑盒基于實時熒光定量PCR技術(shù)，用于定性檢測鯉春病毒血癥病毒（SVCV），適用于魚類樣本的病原診斷及流行病學(xué)監(jiān)測。
產(chǎn)品名稱 | 鯉春病毒血癥病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Spring Viremia of Carp Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4417 |
檢驗原理
通過設(shè)計針對SVCV基因組高度保守區(qū)域的特異性引物和探針，在PCR擴增過程中釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀實時監(jiān)測信號強度，實現(xiàn)對靶基因的定性分析。
主要組成成分
SVCV RT-PCR反應(yīng)液：25T/盒含437.5 μL×1管，50T/盒含875 μL×1管。
SVCV混合酶液：25T/盒含62.5 μL×1管，50T/盒含125 μL×1管。
陽性對照：40 μL×1管（含SVCV靶基因質(zhì)粒）。
陰性對照：40 μL×1管（滅菌純水）。
說明書：1份。
儲存條件及有效期
避光保存于-20℃以下，避免反復(fù)凍融，有效期12個月。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI系列（如7500、QuantStudio）
Bio-Rad系列（如CFX96）
Roche LightCycler 480
杭州博日系列等。
樣本要求
有臨床癥狀的魚：
體長≤4 cm：取整條魚。
體長4~6 cm：取內(nèi)臟（含腎）。
體長>6 cm：取腦、肝、腎、脾。
無癥狀魚：取腎、脾、鰓及腦組織；成熟雌魚需額外采集卵巢液。
檢驗方法
試劑準(zhǔn)備：
試劑解凍后混勻，瞬時離心去除管壁液體。
按反應(yīng)數(shù)（n）計算各組分用量，參考下表配制反應(yīng)體系（示例為20 μL體系）：
| 組分 | 單次反應(yīng)體積 |
| RT-PCR反應(yīng)液 | 17.5 μL |
| 混合酶液 | 2.5 μL |
| 模板DNA/對照 | 5 μL |
PCR程序設(shè)置：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘（可選，若含RT步驟）。
預(yù)變性：95℃ 3分鐘。
擴增循環(huán)（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35且擴增曲線呈S型。
陰性：無Ct值或Ct值>35。
注意事項
實驗分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增區(qū)），避免交叉污染。
陽性對照需單獨處理，防止污染其他組分。
失效或反復(fù)凍融的試劑可能影響檢測靈敏度。
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關(guān)鍵字： 鯉春病毒血癥病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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