百日咳波氏桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 百日咳波氏桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Bordetella pertussis Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR4585 |
檢驗(yàn)原理
染料法檢測：采用SYBR Green等熒光染料，通過摻入雙鏈DNA發(fā)出熒光信號，實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物。
高特異性引物：針對Bordetella pertussis保守序列設(shè)計(jì)，引物長度25-30 bp，確保擴(kuò)增特異性。
靈敏度與線性范圍：檢測下限達(dá)100拷貝/反應(yīng)，定量線性范圍覆蓋5個(gè)數(shù)量級。
操作步驟
樣本處理：提取待測樣本DNA，建議使用高純度模板（濃度≥50 ng/μL）。
反應(yīng)體系配制（20μL）：
10× PCR Buffer
dNTPs
特異性引物對
熒光染料
DNA聚合酶
模板DNA（推薦4~5倍常規(guī)PCR用量）
擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5 min
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（采集熒光信號）
數(shù)據(jù)分析：
熒光閾值設(shè)定為基線信號（前15循環(huán)）標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。
通過Ct值定量或定性分析。
注意事項(xiàng)
試劑處理：
所有組分完全融化后輕柔混勻（避免劇烈振蕩），使用前置于冰上。
避免反復(fù)凍融，分裝保存。
污染控制：
分區(qū)操作（樣本處理、PCR配制、擴(kuò)增區(qū)分離）。
使用無核酸酶耗材。
質(zhì)控要求：
每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰性對照（無模板）和陽性對照（試劑盒提供）。
性能參數(shù)
特異性：不與副百日咳波氏桿菌（B. parapertussis）等近源種交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：批內(nèi)/批間變異系數(shù)（CV）≤5%。
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關(guān)鍵字： 百日咳波氏桿菌;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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