兔食管平滑肌細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)介 ：
兔食管平滑肌分離自食管組織；食管可分為頸段、胸段和腹段，脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，肌層上1/3段為骨骼肌，下1/3為平滑肌，中段為骨骼肌和平滑肌混合組成。其中，肌纖維的排列方式分為內(nèi)環(huán)形和外縱形兩層。食管的蠕動(dòng)是由食管平滑肌收縮嚴(yán)格控制，食管還有括約肌，位于環(huán)狀軟骨水平的，稱(chēng)為食管上括約?。晃挥谑彻芟露?，一部分在膈上，穿過(guò)膈孔，另一部分在膈下的高壓帶，稱(chēng)為食管下括約肌。食管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10^5Cells/T25 | 英文名稱(chēng) | Rabbit Esophageal Smooth Muscle Cells |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
貨號(hào) | XG-X5253 | 組織來(lái)源 | 食管 |
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱(chēng) 兔食管平滑肌細(xì)胞
英文名稱(chēng) Rabbit Esophageal Smooth Muscle Cells
組織來(lái)源 食管
默認(rèn)種屬 兔
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳5代左右；3代以?xún)?nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔食管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔食管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔食管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
原代細(xì)胞培養(yǎng)（Primary Culture）是指從機(jī)體中直接取出組織或器官，通過(guò)酶消化或機(jī)械方法分散成單個(gè)細(xì)胞或組織塊，
在體外模擬體內(nèi)環(huán)境進(jìn)行首次培養(yǎng)的過(guò)程。由于原代細(xì)胞剛從活體組織分離，其生物學(xué)特性、
遺傳背景和功能狀態(tài)最接近體內(nèi)真實(shí)情況，因此在藥物篩選、毒理學(xué)研究、疾病機(jī)制探索和病毒學(xué)等領(lǐng)域具有不可替代的價(jià)值。
核心特點(diǎn)
高度生理相關(guān)性：保留了體內(nèi)來(lái)源組織的結(jié)構(gòu)、功能和基因表達(dá)特征。
有限壽命：與無(wú)限增殖的腫瘤細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖能力有限，經(jīng)過(guò)一定次數(shù)的分裂后會(huì)進(jìn)入衰老期，這更符合正常細(xì)胞的生理狀態(tài)。
異質(zhì)性：初始培養(yǎng)物通常是多種細(xì)胞類(lèi)型的混合物，有時(shí)需要通過(guò)差速貼壁等方法進(jìn)行純化。
操作要求高：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境、試劑質(zhì)量和無(wú)菌操作的要求極為嚴(yán)格，培養(yǎng)難度大于永生化細(xì)胞系。
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細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
1. 細(xì)胞復(fù)蘇
運(yùn)輸與接收：細(xì)胞以液氮凍存形式運(yùn)輸，收到后立即用75%酒精噴灑消毒細(xì)胞瓶，置于超凈臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作。
復(fù)蘇操作：將細(xì)胞瓶放入37℃、5% CO培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)穩(wěn)定狀態(tài)，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和密度，記錄初始狀態(tài)（建議40x、100x、200x各拍一張照片）。
2. 細(xì)胞傳代
傳代時(shí)機(jī)：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%匯合度時(shí)進(jìn)行傳代。
操作步驟：
棄去舊培養(yǎng)基，用無(wú)鈣鎂PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液（1-2 mL），37℃孵育1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓脫落。
加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細(xì)胞完全脫落。
離心（1000 RPM，5分鐘），棄上清，用1-2 mL培養(yǎng)基重懸。
按1:2比例分瓶傳代（如T25瓶分至兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基至5 mL。
換液頻率：每2-3天換液一次。
3. 細(xì)胞凍存
凍存液：使用無(wú)血清凍存液。
凍存步驟：細(xì)胞傳代后，用胰蛋白酶消化并離心，重懸于凍存液，緩慢降溫至-114℃，最終轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
關(guān)鍵字： 兔食管;平滑肌細(xì)胞;
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