脫氫酶（dehydrogenase, DHA）試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
脫氫酶(dehydrogenase, DHA) 是一類催化物質(zhì)氧化還原反應(yīng)的酶，催化底物通過(guò)細(xì)胞色素系統(tǒng)被氧化，釋放的能量供機(jī)體使用，是生物體取得能量的一種方式。
測(cè)定原理：
在細(xì)胞呼吸過(guò)程中，氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在脫氫酶作用下接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF呈現(xiàn)紅色，在波長(zhǎng)485nm處有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm測(cè)定其吸光值，即得脫氫酶活性。
需自備儀器和用品：
篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸餾水、甲醇（不允許快遞，請(qǐng)用戶自備）。
樣品處理：
1、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心20min。
3、液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
| 空白管 | 測(cè)定管 |
樣品（μl） |
| 150 |
蒸餾水（μl） | 150 |
|
試劑一（μl） |
| 150 |
試劑二（μl） | 150 |
|
充分混勻，37℃培養(yǎng)24h
振蕩1h，8000g，25℃，離心5min，取1ml上清于比色皿，測(cè)定A485，△A=A測(cè)定-A空白管?？瞻坠苤灰鲆还?。
脫氫酶活力計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0422x - 0.0312；R2 = 0.9988；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y為吸光值。
1.按照蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：在37℃時(shí)，每mg蛋白樣品每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個(gè)酶活性單位。
DHA（μg/ min / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷（Cpr×V樣）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：在37℃時(shí)，每克樣品每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個(gè)酶活性單位。
DHA（μg/ min /g 鮮重）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷W
3. 按液體體積計(jì)算
酶活單位定義：在37℃時(shí)，每ml樣本每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個(gè)酶活性單位。
DHA（μg/ min /ml）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷V樣÷T= 0.181×（△A+0.0312）
V反總：反應(yīng)總體積，1.65ml；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.15ml；T：培養(yǎng)時(shí)間，1d=1440min；W：樣品質(zhì)量，g； Cpr：蛋白濃度，mg/ml。
注意事項(xiàng)：
配制好的試劑一避光保存于4℃，最好在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。
關(guān)鍵字： 脫氫酶（DHA）;脫氫酶（DHA）檢測(cè)試劑盒;
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。