脂氧合酶(Lipoxygenase, LOX)活性測定試劑盒說明書
分光光度法 50管/24樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
LOX廣泛存在于動植物組織中,催化不飽和脂肪酸氧化反應,導致膜脂過氧化。在生物體的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。
測定原理:
LOX催化亞油酸氧化,氧化產物在280nm處有特征吸收峰;測定280nm吸光度增加速率,來計算LOX活性。
自備儀器和用品:
研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1ml石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質量(g):試劑一體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。
測定:
1. 分光光度計預熱30 min,調節(jié)波長到280nm,蒸餾水調零。
2. 在試劑三中加入25ml試劑二(振蕩混勻1min),在30℃水浴中預熱10 min以上。用不完的試劑4℃保存。
3. 對照管:依次在1ml石英比色皿中加入100μl樣本和900μl試劑二,30℃反應30min后,記錄A對照。
4. 測定管:依次在1ml石英比色皿中加入100μl樣本和900μl試劑三,30℃反應30min后,記錄A測定。
5. ΔA=A測定-A對照
LOX活性計算公式:
(1)按照蛋白濃度計算
活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.01個單位為1個酶活單位。
LOX (U/mg prot) =ΔA×V反總÷(Cpr×V樣)÷T×100
= 33.33×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質量計算
活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化0.01個單位為1個酶活單位。
LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T×100
= 33.33×ΔA÷W
Cpr:上清液蛋白濃度,mg/ml,需另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μl=0.1ml;V反總:反應總體積,1ml;V樣總:上清液總體積,1ml;W:樣本質量,g;T:反應時間,30min。
關鍵字: 脂氧合酶(LOX)檢測試劑盒;
伊勢久(江蘇連云港)生物科技有限責任公司,成立于2019年,坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦,主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關試劑的研發(fā)和生產。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內的2000平米的生產、研發(fā)基地已建成投入運行,其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心,現(xiàn)已生產出的脲酶、tRNA轉運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產品,熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
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