血磷濃度檢測試劑盒說明書

                                                  微量法 100T/96S

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義：

血磷主要指血中的無機磷，以無機磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切，在以mg/dL表示時，二者的乘積(［Ca］×［P］)為30～40。當(dāng)(［Ca］×［P］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織；若(［Ca］×［P］)<35則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。

測定原理：

去除血清中有機磷后，無機磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色，在620nm有光吸收；通過測定620 nm吸光度，計算血液中磷含量。

自備儀器和用品：

離心機、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。

血磷濃度測定操作：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到620 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍。

3. 血清預(yù)處理：吸取50 μl血清，加950μl試劑一，混勻后室溫8000rpm，離心10min，取上清液，待測。

4. 空白管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μl蒸餾水，50μl試劑一，100μl試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A空白管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μl標(biāo)準(zhǔn)液，50μl試劑一，100μl試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

6. 測定管：取微量石英比色皿/96孔板，依次加入50μl上清液，50μl試劑一，100μl試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

血磷濃度計算：

血磷含量（mmol/dL）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=2×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L；樣品稀釋倍數(shù)：（50 μl血清+950μl試劑一）÷50 μl血清=20；V樣總：100 ml=0.1 L。

注意事項：

1、 試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3天；

2、 測定過程中，應(yīng)盡量避免溶血，因為紅細(xì)胞中有機磷酯進入血清后可被酶水解而使得血清無機磷含量增高。

3、 最低檢出限為10μmol/L。