甲基化樣蛋白4抗體
原理特點
該抗體靶向甲基化樣蛋白4，原理是特異性識別表觀遺傳甲基化調(diào)控蛋白抗原位點，參與組蛋白甲基化修飾、基因沉默調(diào)控。產(chǎn)品特點為靶向?qū)Ｒ?、背景低，可精?zhǔn)檢測蛋白表達(dá)變化，適配表觀遺傳修飾、細(xì)胞分化、腫瘤基因調(diào)控研究。
英文名稱:METTL4 Rabbit pAb
中文名稱:甲基化樣蛋白4抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:FLJ11350; methyltransferase like 2; Methyltransferase like 2B; Methyltransferase-like protein 2B; METL; METTL2; METTL2A; PSENIP1.
交叉反應(yīng):Mouse,Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human METTL4
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：54 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點背景
表觀遺傳調(diào)控：甲基化樣蛋白4（METTL4）是RNA甲基轉(zhuǎn)移酶，催化RNA分子的甲基化修飾，參與RNA加工、穩(wěn)定性和翻譯調(diào)控，維持基因表達(dá)和細(xì)胞功能穩(wěn)態(tài)，是表觀遺傳調(diào)控的關(guān)鍵分子。
疾病關(guān)聯(lián)：METTL4功能異常與腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等相關(guān)；在腫瘤中通過調(diào)控RNA甲基化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和耐藥性形成，其表達(dá)水平與腫瘤惡性程度和不良預(yù)后相關(guān)，是腫瘤治療的潛在靶點。
研究價值：METTL4抗體可用于檢測METTL4表達(dá)水平，研究RNA甲基化調(diào)控機(jī)制、疾病發(fā)病機(jī)制，開發(fā)靶向METTL4的治療藥物；評估ME???
樣本處理與實驗操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時
一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時），或室溫孵育1-2小時；孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）
樣本制備
細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時，或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長讀取OD值
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關(guān)鍵字： 甲基化樣蛋白4抗體;54 kDa;Rabbit;
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