磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體
原理特點(diǎn)
該抗體特異性識(shí)別FoxO1蛋白Ser319位點(diǎn)磷酸化修飾，精準(zhǔn)檢測(cè)該特定位點(diǎn)的活化狀態(tài)，該位點(diǎn)磷酸化直接調(diào)控FoxO1核輸出與失活，參與糖代謝、細(xì)胞周期調(diào)控，可用于位點(diǎn)特異性的通路活化檢測(cè)與功能干預(yù)。
英文名稱:phospho-FoxO1 (Ser319) Rabbit pAb
中文名稱:磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:FOXO1A(phospho S319); p-FOXO1A(phospho S319); FKHR(phospho-Ser319); Forkhead box protein O1; Afxh; AI876417; FKHR; Fkhr1; Foxo1a; Forkhead; FKH 1; FKH1; FKH1; FKHR; FKHR; Forkhead(Drosophila) homolog 1(rhabdomyosarcoma); Forkhead(Drosophila) homolog 1(rhabdomyosarcoma); Forkhead box O1; Forkhead box protein O1; Forkhead box protein O1A; Forkhead in rhabdomyosarcoma; Forkhead, Drosophila, homolog of, in rhabdomyosarcoma; FOXO1; FOXO1; FOXO1_HUMAN; FOXO1A.
交叉反應(yīng):Human,Mouse,Rat
抗體來(lái)源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human FoxO1 around the phosphorylation site of Ser319
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：72 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：Preservative: 0.02% Proclin300, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH7.4.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
靶點(diǎn)背景：FOXO1 調(diào)控糖脂代謝、肌肉分化、腫瘤凋亡；Ser319 位點(diǎn)磷酸化是 AKT 通路介導(dǎo)其胞質(zhì)滯留失活的關(guān)鍵修飾位點(diǎn)。
抗體原理：人工合成僅 Ser319 磷酸修飾的 FOXO1 多肽免疫，位點(diǎn)絕對(duì)特異性，不識(shí)別 FOXO1 其他磷酸位點(diǎn)及 FOXO3/4。
產(chǎn)品特點(diǎn)：?jiǎn)挝稽c(diǎn)精準(zhǔn)檢測(cè)，可解析 FOXO1 不同修飾位點(diǎn)的差異化調(diào)控功能，多用于糖尿病、肌肉萎縮、婦科腫瘤精細(xì)通路研究。
核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過(guò)夜；或室溫孵育1-2小時(shí)，孵育時(shí)保證膜完全浸沒(méi)在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過(guò)夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時(shí)間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過(guò)夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng)根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過(guò)夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時(shí)；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜。
檢測(cè)：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時(shí)；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀取OD值。
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關(guān)鍵字： 磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體;72 kDa;Rabbit;
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