磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體
原理特點(diǎn)
MKK3/6磷酸化活化是p38 MAPK通路的上游激活激酶，介導(dǎo)炎癥、應(yīng)激信號(hào)傳導(dǎo)。該抗體特異性識(shí)別其磷酸化形式，檢測(cè)通路上游活化水平；阻斷激酶功能可從上游抑制p38炎癥應(yīng)激通路。
英文名稱(chēng):phospho-MKK3(Ser218) + MKK6(Ser207) Rabbit pAb
中文名稱(chēng):磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:MKK3(phospho-Ser218); MAP Kinase Kinase 3; Dual specificity mitogen activated protein kinase kinase 3; ERK kinase 3; MAP kinase kinase 3; MAP2K 3; MAPK ERK kinase 3; MAPK kinase 3; MAPKK 3; MAPKK3; MEK 3; MEK3; Mitogen activated protein kinase kinase 3; MKK 3; MKK3; mMKK 3b; mMKK3b; MPK 3; PRKMK 3; PRKMK3; Protein kinase mitogen activated kinase 3; SKK2; zMKK 3; MP2K3_HUMAN; MP2K6_HUMAN
交叉反應(yīng):Human,Mouse,Rat
抗體來(lái)源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human MKK3 around the phosphorylation site of Ser218
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類(lèi)型:Polyclonal
理論分子量：39 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
靶點(diǎn)背景：MKK3、MKK6 是 p38 MAPK 上游專(zhuān)屬激酶，雙者磷酸化后專(zhuān)一激活 p38，介導(dǎo)炎癥、應(yīng)激、凋亡信號(hào)。
抗體原理：MKK3/6 同源磷酸化位點(diǎn)肽免疫，同步識(shí)別兩種活化上游激酶，區(qū)分非磷酸化 MKK3/6。
產(chǎn)品特點(diǎn)：可一步檢測(cè) p38 通路上游激活開(kāi)關(guān)，常用于炎癥因子刺激、氧化應(yīng)激損傷通路上下游聯(lián)動(dòng)分析。
樣本處理與實(shí)驗(yàn)操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)
一抗稀釋后4℃孵育過(guò)夜（12-16小時(shí)），或室溫孵育1-2小時(shí)；孵育時(shí)保證膜完全浸沒(méi)在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋?zhuān)┦覝胤跤?-2小時(shí)
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過(guò)夜；孵育時(shí)置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀(guān)察控制時(shí)間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）
樣本制備
細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類(lèi)型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過(guò)夜，或室溫孵育1-2小時(shí)
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋?zhuān)?，室溫避光孵?0-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀(guān)察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過(guò)夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時(shí)
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時(shí)，或4℃孵育過(guò)夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時(shí)
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀取OD值
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關(guān)鍵字： 磷酸化絲裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗體;Rabbit;39 kDa;
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