磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3重組兔單抗
原理特點(diǎn)
該重組兔單克隆抗體通過基因重組技術(shù)制備，對磷酸化STAT3位點(diǎn)具備超高特異性與親和力，背景極低、靈敏度極高。其可精準(zhǔn)捕捉微量活化態(tài)STAT3蛋白，適用于微量樣本、低豐度磷酸化蛋白的精準(zhǔn)檢測；同時(shí)可高效封閉STAT3磷酸化活性位點(diǎn)，強(qiáng)效阻斷下游信號(hào)通路，精準(zhǔn)干預(yù)腫瘤增殖、慢性炎癥進(jìn)程，適配高端定量實(shí)驗(yàn)與精準(zhǔn)靶向機(jī)制研究。
英文名稱:phospho-STAT3 (Ser727) Recombinant Rabbit mAb
中文名稱:磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3重組兔單抗
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Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:STAT3(phospho S727); p-STAT3(phospho S727); STAT3(phospho Ser727); STAT3(phospho S727); p-STAT3(Ser727); Acute Phase Response Factor; APRF; DNA binding protein APRF; Signal Transductor and Activator of Transcription 3; STAT 3; STAT3_HUMAN.
交叉反應(yīng):Human,Mouse,Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:A synthesized peptide derived from human STAT3 around the phosphorylation site of S727
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Recombinant
克隆號(hào)：4G1
理論分子量：88 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
靶點(diǎn)背景：STAT3 Y705 磷酸化激活是腫瘤免疫微環(huán)境關(guān)鍵調(diào)控節(jié)點(diǎn)。
抗體原理：基因重組體外表達(dá)兔源單抗序列，無動(dòng)物免疫，克隆位點(diǎn)精準(zhǔn)鎖定活化磷酸位點(diǎn)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：無限量產(chǎn)、零批次差異、多色熒光 / 多重 IHC 兼容，高分文章與臨床轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)首選。
核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時(shí)，孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時(shí)間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時(shí)；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過夜。
檢測：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時(shí)；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長讀取OD值。
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關(guān)鍵字： 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3重組兔單抗;88 kDa;Rabbit;
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