本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標(biāo)板預(yù)先包被大鼠Cyt-C特異性單克隆抗體。待測樣本中的細(xì)胞色素C抗原與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗板后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心結(jié)構(gòu)。后續(xù)通過酶促顯色反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物濃度與樣本中Cyt-C含量正相關(guān)，檢測吸光度并對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，可精準(zhǔn)定量大鼠Cyt-C的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒
英文名稱：Cyt-C ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1278
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度≤0.15ng/mL
檢測范圍：0.3ng/mL - 12ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：全程95分鐘，孵育55分鐘，顯色25分鐘
保存條件：2-8℃避光保存，標(biāo)準(zhǔn)品-20℃分裝凍存
有效期：未開封8個(gè)月，標(biāo)準(zhǔn)品解凍后7天內(nèi)使用
特異性：特異性檢測大鼠線粒體細(xì)胞色素C，與胞質(zhì)同源蛋白無交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%
注意事項(xiàng)：溶血樣本會(huì)釋放內(nèi)源Cyt-C，導(dǎo)致結(jié)果偏高，需嚴(yán)格篩選樣本；實(shí)驗(yàn)全程無酶污染。
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點(diǎn)
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
酶標(biāo)板室溫平衡 33min，倍比稀釋 Cyt-C 標(biāo)準(zhǔn)品，組織裂解液樣本稀釋處理，空白孔加稀釋液，每孔 50μL。
每孔加入酶標(biāo)記結(jié)合試劑 50μL，封板膜密封，37℃孵育 70min。
洗板 5 次，每次浸泡 34s，棄液后吸水紙拍凈殘液。
顯色 A、B 液各 50μL 加入震蕩混勻，避光顯色 20min。
滴加終止液 50μL 終止顯色。
10min 內(nèi) 450nm 檢測 OD 值。
標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算稀釋后濃度，得到樣本細(xì)胞色素 C 原始濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠細(xì)胞色素C;Cyt-C;ELISA試劑盒;
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