?產(chǎn)品名稱(chēng):鵝裂口線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng):Amidostomum anseriPCR
貨號(hào):YS-P013809
分類(lèi):PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
線蟲(chóng)線粒體 COⅠ 基因特異性引物 PCR,鵝腸道組織、糞便樣本核酸擴(kuò)增,電泳條帶判定鵝裂口線蟲(chóng)感染。
熒光定量探針 PCR,靶向線蟲(chóng)特有線粒體基因,依據(jù)熒光 Ct 值定量樣本中線蟲(chóng)核酸載量。
巢式 PCR 兩步擴(kuò)增,低蟲(chóng)卵含量糞便樣本先廣譜線蟲(chóng)引物初擴(kuò),再鵝裂口線蟲(chóng)特異性引物二次擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)流程:
DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA,確保無(wú)抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(樣本制備區(qū))
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào),每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用帶濾芯槍頭)。
梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照:
7號(hào)管:加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽(yáng)性對(duì)照,震蕩混勻,得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品;
依次稀釋至2號(hào)管,最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)(1×10^7至1×10^3拷貝/μL)。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用,避免反復(fù)凍融。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻,短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL,含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣(樣本處理區(qū))
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管,陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋,避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀:
預(yù)變性:95℃ 2分鐘;
循環(huán)階段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號(hào));
熔解曲線分析(可選)。
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注意事項(xiàng):
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,陽(yáng)性模板僅在生物安全柜開(kāi)蓋;
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄;
試劑避免反復(fù)凍融,單次融化冰上放置不超過(guò) 2 h,使用完畢立即放回 - 20℃;
移液器吸頭一次性使用,禁止重復(fù)吸取,防止交叉污染;
試劑盒僅用于科研檢測(cè),嚴(yán)禁人臨床體外診斷;
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū),防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室;
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶,全部更換全新試劑盒,實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過(guò)夜消毒。
關(guān)鍵字: 鵝裂口線蟲(chóng);PCR檢測(cè)試劑盒;
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