本試劑盒依托PCR特異性擴(kuò)增原理，靶向牛仰口線蟲(chóng)基因組保守序列，可檢測(cè)牛糞便、腸道組織、血液樣本中的蟲(chóng)體核酸，實(shí)現(xiàn)牛仰口線蟲(chóng)感染的分子生物學(xué)診斷。牛仰口線蟲(chóng)是牛常見(jiàn)消化道寄生蟲(chóng)，易引發(fā)牛貧血、消瘦、腸道損傷，試劑盒可精準(zhǔn)檢出輕度感染與隱性感染，彌補(bǔ)傳統(tǒng)鏡檢的不足。適用于規(guī)?；?chǎng)寄生蟲(chóng)篩查、感染確診、驅(qū)蟲(chóng)效果評(píng)估及畜禽寄生蟲(chóng)病防控。
產(chǎn)品名稱 | 牛仰口線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P013964 |
英文名稱 | Bunostomum phlebotomumPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
提取牛糞中線蟲(chóng)蟲(chóng)卵 DNA，qPCR 靶向牛仰口線蟲(chóng) ITS 間隔區(qū)特異性序列，熒光探針檢出蟲(chóng)體核酸。
普通 PCR 擴(kuò)增線蟲(chóng)肌動(dòng)蛋白特有基因，電泳條帶區(qū)分牛仰口線蟲(chóng)與其他消化道線蟲(chóng)。
糞便蟲(chóng)卵富集后磁珠提純 DNA，大幅降低糞便雜質(zhì)對(duì) PCR 擴(kuò)增的抑制。
?操作步驟?：
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
?注意事項(xiàng)?：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽(yáng)性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
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