?產(chǎn)品名稱:中央無漿體PCR檢測試劑盒
英文名稱:Anaplasma centrale PCR
貨號:YS-P013812
分類:PCR檢測試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測原理:
靶向中央無漿體 msp4 膜蛋白基因特異性引物,血液樣本 DNA 擴增,普通 PCR 電泳檢測牛羊無漿體感染。
Taqman 熒光 qPCR 探針體系,專一識別菌種特有基因位點,實時熒光定量血液內(nèi)菌核酸濃度。
巢式兩步 PCR,針對低菌載量抗凝全血樣本,提升蜱傳微量無漿體檢出率。
實驗流程:
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA,建議濃度≥10 ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標準曲線制備(獨立操作區(qū))
標記6管為梯度稀釋點(如7-2),每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽性對照依次稀釋,混勻后作為標準品(避免污染)。
3. PCR反應(yīng)體系配制(試劑配制區(qū))
按以下比例配制(示例):
| 組分 | 體積(μL) |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機檢測
程序設(shè)置:預(yù)變性95℃ 3 min;40循環(huán)(95℃ 10 s, 60℃ 30 s);熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析:根據(jù)Ct值及標準曲線計算樣本濃度。
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注意事項:
1、實驗分區(qū)管理?
實驗全程需嚴格劃分三個獨立區(qū)域:?試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)?,各區(qū)實驗服、移液器及耗材?嚴禁混用?,防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭,每步更換槍頭;
陽性對照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進行,避免污染其他試劑;
加樣后立即蓋緊管蓋,避免氣溶膠擴散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?,避免反復(fù)凍融,確保穩(wěn)定性;
使用前于冰上解凍并輕柔混勻,瞬時離心后使用。
關(guān)鍵字: 中央無漿體;PCR檢測試劑盒;
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