本試劑盒采用RT-PCR熒光檢測技術(shù),特異性針對卡奇谷病毒RNA核酸設(shè)計引物探針,可精準(zhǔn)檢測媒介昆蟲、畜禽疑似樣本、環(huán)境樣本中的病毒核酸??ㄆ婀炔《緸橄x媒傳播病毒,易引發(fā)畜禽發(fā)熱、神經(jīng)系統(tǒng)損傷,試劑盒檢測快速、特異性強,可實現(xiàn)早期疫情預(yù)警。適用于蟲媒病毒疫病監(jiān)測、牧區(qū)及養(yǎng)殖區(qū)病毒排查、疑似病例溯源及流行病學(xué)研究。
產(chǎn)品名稱 | 卡奇谷病毒PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P013970 |
英文名稱 | Cache Valley virus(CVV)RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理:

蚊蟲研磨樣本 RNA 一步法 RT-qPCR,靶向卡奇谷病毒包膜蛋白基因,探針熒光檢出蟲媒病毒。
巢式 RT-PCR 擴增病毒復(fù)制酶基因,微量蚊蟲攜帶病毒也可穩(wěn)定檢出。
熔解曲線 RT-PCR,依靠特征 Tm 值區(qū)分卡奇谷病毒與其他腦炎蟲媒病毒。
?操作步驟?:

樣本制備:
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制(20 μL體系示例):
預(yù)混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特異性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
補充無核酸酶水至終體積。
PCR擴增程序:
預(yù)變性:95℃ 5分鐘;
循環(huán)階段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號);
熔解曲線分析:60~95℃(可選,用于驗證擴增特異性)。
結(jié)果判讀:
陽性:Ct值≤35且熔解曲線峰單一;
陰性:Ct值≥40或無擴增曲線;
可疑:35<Ct值<40,建議復(fù)測或結(jié)合熔解曲線分析。
?注意事項?:

所有耗材必須無核酸酶,吸頭一次性使用,禁止重復(fù)吸取;
陽性模板拷貝濃度高,開蓋操作輕柔,避免氣溶膠擴散造成全域污染;
試劑融化后冰上放置不超過 2 h,用完立即放回 - 20℃;
廢棄 PCR 管、擴增產(chǎn)物、實驗廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄;
試劑盒僅用于動植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測,禁止人體臨床檢測;
移液器、操作臺定期紫外消毒,長期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
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