本試劑盒特異性靶向胎兒彎曲桿菌性病亞種專屬基因序列，采用熒光PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)核酸檢測(cè)，可檢測(cè)畜禽生殖道分泌物、胎盤、胎兒組織樣本中的病原菌。該亞種是引發(fā)畜禽不孕、流產(chǎn)、生殖道炎癥的核心致病菌，試劑盒特異性極強(qiáng)，可精準(zhǔn)區(qū)分彎曲桿菌其他亞種。適用于畜禽繁殖障礙疫病溯源、種畜禽篩查、繁育種群凈化及生殖道疫病防控。
產(chǎn)品名稱 | 胎兒彎曲桿菌性病亞種PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P013975 |
英文名稱 | Campylobacter fetus subsp. VenerealisPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
牛、羊生殖道拭子 DNA qPCR，靶向胎兒彎曲桿菌性病亞種特異性 sapA 基因，專一熒光信號(hào)檢出。
普通 PCR 擴(kuò)增亞種特有鞭毛蛋白基因，電泳區(qū)分胎兒彎曲桿菌其他亞種。
流產(chǎn)胎兒病料磁珠富集細(xì)菌核酸后巢式 PCR，極低菌載量可檢出。
?操作步驟?：
樣本處理（樣本處理區(qū)）
推薦使用磁珠法或離心柱法提取核酸，避免交叉污染。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)體系（20μL/管）：19μL反應(yīng)液 + 1μL酶液，分裝后加入5μL待測(cè)核酸或質(zhì)控品。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
循環(huán)參數(shù)：
預(yù)變性：95℃ 2min（1循環(huán)）；
擴(kuò)增：95℃ 15sec → 60℃ 30sec（45循環(huán)，60℃時(shí)采集熒光信號(hào)，F(xiàn)AM通道）。
結(jié)果分析
陽性：Ct值≤40，擴(kuò)增曲線呈指數(shù)增長(zhǎng)；
陰性：無Ct值或曲線平直；
可疑：40<Ct≤45，需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
質(zhì)控要求：陽性質(zhì)控Ct≤32，陰性質(zhì)控?zé)o擴(kuò)增。
?注意事項(xiàng)?：
所有試劑避免反復(fù)凍融，可分裝小體積凍存；融化后冰上放置不超過 2 h，酶失活會(huì)直接導(dǎo)致無擴(kuò)增條帶
陽性質(zhì)?？截悢?shù)極高，開蓋全程在生物安全柜操作，防止氣溶膠污染實(shí)驗(yàn)室
所有耗材必須無核酸酶，槍頭一次性使用；實(shí)驗(yàn)后 PCR 管、廢液 121℃高壓滅菌后丟棄
試劑盒出現(xiàn)渾濁、變色、結(jié)冰分層、過期禁止使用
僅限科研檢測(cè)，嚴(yán)禁用于人體臨床疾病診斷、食品出廠檢疫等合規(guī)檢測(cè)場(chǎng)景
土壤、糞便、腐殖質(zhì)樣本優(yōu)先使用磁珠法提取核酸，減少抑制劑干擾
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關(guān)鍵字： 胎兒彎曲桿菌性病亞種;PCR檢測(cè)試劑盒;
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