本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，用于特異性檢測(cè)犬樣本中的犬副流感病毒核酸，可適配犬鼻拭子、咽拭子、肺組織等呼吸道樣本。針對(duì)犬副流感病毒傳播速度快、易引發(fā)犬群呼吸道交叉感染的特點(diǎn)，試劑盒優(yōu)化了核酸擴(kuò)增體系，靈敏度高，可精準(zhǔn)檢出低病毒載量的隱性感染、早期感染樣本，杜絕漏檢。產(chǎn)品操作便捷、檢測(cè)周期短，能夠快速區(qū)分犬副流感與犬瘟熱、犬腺病毒等相似癥狀呼吸道疫病，廣泛應(yīng)用于寵物臨床診療、犬場(chǎng)疫病篩查、出入境寵物檢疫等場(chǎng)景，助力犬類呼吸道疫病的早發(fā)現(xiàn)、早防控。
產(chǎn)品名稱 | 犬副流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P013987 |
英文名稱 | Canine Parainfluenza Virus(CPIV)RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
針對(duì)犬副流感病毒 NP 核蛋白保守序列設(shè)計(jì)特異性上下游引物，樣本 RNA 經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后完成 PCR 擴(kuò)增，依據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小定性檢測(cè)病毒。
熒光探針法 qRT-PCR，擴(kuò)增時(shí)探針與病毒靶序列結(jié)合發(fā)光，通過熒光曲線有無區(qū)分樣本是否攜帶犬副流感病毒。
巢式 RT-PCR 雙重?cái)U(kuò)增，第一輪廣譜引物擴(kuò)增副流感病毒同源片段，第二輪特異性引物二次擴(kuò)增，大幅降低低病毒載量樣本漏檢概率。
?操作步驟?：
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽性對(duì)照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
?注意事項(xiàng)?：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
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關(guān)鍵字： 犬副流感病毒;PCR檢測(cè)試劑盒;
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