?產(chǎn)品名稱:地衣形芽孢桿菌PCR檢測試劑盒
英文名稱:Bacillus licheniformisPCR
貨號:YS-P013880
分類:PCR檢測試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測原理:
靶向地衣形芽孢桿菌特有 rpoB 基因設計特異性引物,與枯草、炭疽等其他芽孢桿菌無同源結合位點。
土壤樣本配套去腐殖酸緩沖液,清除土壤有機質 PCR 抑制劑,適配環(huán)境土壤分離樣本檢測。
終點電泳條帶大小唯一性判定,依據(jù)產(chǎn)物片段長度直接區(qū)分該菌種。
實驗流程:
DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA,確保無抑制劑殘留。
標準曲線制備(樣本制備區(qū))
標記6支離心管為7至2號,每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用帶濾芯槍頭)。
梯度稀釋陽性對照:
7號管:加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照,震蕩混勻,得1×10^7拷貝/μL標準品;
依次稀釋至2號管,最終濃度跨5個數(shù)量級(1×10^7至1×10^3拷貝/μL)。
所有標準品置于冰上備用,避免反復凍融。
試劑配制(試劑準備區(qū))
反應液避光解凍后渦旋混勻,短暫離心分裝至PCR管。
每反應體系20 μL,含預混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣(樣本處理區(qū))
分別加入5 μL待測DNA或標準品至反應管,陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋,避免氣泡干擾。
PCR擴增(核酸擴增區(qū))
按以下程序運行定量PCR儀:
預變性:95℃ 2分鐘;
循環(huán)階段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號);
熔解曲線分析(可選)。
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注意事項:
試劑盒含生物源性質粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,陽性模板僅在生物安全柜開蓋;
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實驗后 121℃高壓滅菌再丟棄;
試劑避免反復凍融,單次融化冰上放置不超過 2 h,使用完畢立即放回 - 20℃;
移液器吸頭一次性使用,禁止重復吸取,防止交叉污染;
試劑盒僅用于科研檢測,嚴禁人臨床體外診斷;
擴增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū),防止氣溶膠大面積污染實驗室;
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶,全部更換全新試劑盒,實驗室臺面、移液器紫外過夜消毒。
關鍵字: 地衣形芽孢桿菌;PCR檢測試劑盒;
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