本試劑盒專為豬瘟病毒疫苗株核酸鑒別檢測研發(fā)，采用特異性PCR擴(kuò)增技術(shù)，可精準(zhǔn)識別豬瘟疫苗株基因片段，有效區(qū)分疫苗株與野生毒株。豬瘟疫苗免疫后，常規(guī)檢測無法區(qū)分免疫帶毒與自然感染，易造成誤診誤判。本試劑盒針對性設(shè)計(jì)專屬引物探針，特異性極強(qiáng)，可精準(zhǔn)完成疫苗株核酸定性檢測，適配豬血液、淋巴組織等樣本，適用于豬場免疫效果監(jiān)測、疫苗免疫后毒株鑒別、疫病排查甄別等場景，解決豬瘟檢測鑒別難題。
產(chǎn)品名稱 | 豬瘟病毒疫苗株PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014024 |
英文名稱 | Classical Swine Fever VirusVaccine(CSFVVaccine)RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
豬組織 RNA 反轉(zhuǎn)錄 cDNA，靶向疫苗株特異性缺失基因引物 RT-PCR，電泳條帶區(qū)分疫苗毒株。
分型熒光 qRT-PCR，專屬探針識別疫苗株特有基因位點(diǎn)，定量免疫豬體內(nèi)疫苗病毒載量。
差異位點(diǎn)巢式 RT-PCR，依托野毒與疫苗株基因序列差異，特異性擴(kuò)增疫苗株靶序列無野毒交叉。
?操作步驟?：
1. DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽性對照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
?注意事項(xiàng)?：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽性對照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
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