?產(chǎn)品名稱:庫蠓通用PCR檢測試劑盒
英文名稱:Culicoides spp.PCR
貨號:YS-P014076
分類:PCR檢測試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測原理:
庫蠓屬特有 ITS 間隔序列為靶標,吸血蠓蟲核酸通用 PCR 篩查全部庫蠓種類。
線粒體 ND4 基因熒光定量 qPCR,探針特異性識別庫蠓核酸,區(qū)分其他吸血昆蟲。
蠓蟲研磨裂解提取 DNA,屬通用引物擴增保守基因,電泳判定庫蠓樣本。
實驗流程:
樣本制備:
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反應體系配制(20 μL體系示例):
預混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特異性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
補充無核酸酶水至終體積。
PCR擴增程序:
預變性:95℃ 5分鐘;
循環(huán)階段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號);
熔解曲線分析:60~95℃(可選,用于驗證擴增特異性)。
結果判讀:
陽性:Ct值≤35且熔解曲線峰單一;
陰性:Ct值≥40或無擴增曲線;
可疑:35<Ct值<40,建議復測或結合熔解曲線分析。
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注意事項:
所有耗材必須無核酸酶,吸頭一次性使用,禁止重復吸取;
陽性模板拷貝濃度高,開蓋操作輕柔,避免氣溶膠擴散造成全域污染;
試劑融化后冰上放置不超過 2 h,用完立即放回 - 20℃;
廢棄 PCR 管、擴增產(chǎn)物、實驗廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄;
試劑盒僅用于動植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測,禁止人體臨床檢測;
移液器、操作臺定期紫外消毒,長期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
關鍵字: 庫蠓通用;PCR檢測試劑盒;
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