?產(chǎn)品名稱:腸道病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Enterovirus(EV)RTPCR
貨號(hào):YS-P014154
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
靶向所有腸道病毒高度保守 5' 非編碼區(qū)基因,廣譜識(shí)別脊髓、柯薩奇、埃可病毒
提取糞便、咽拭子中病毒 RNA,逆轉(zhuǎn)錄生成 cDNA 后再進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增
探針與保守?cái)U(kuò)增片段特異性結(jié)合產(chǎn)生熒光,一次反應(yīng)篩查全部常見(jiàn)腸道病毒
實(shí)驗(yàn)流程:
1. DNA提取(樣本制備區(qū))
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA,建議濃度≥10 ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(獨(dú)立操作區(qū))
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)(如7-2),每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋,混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品(避免污染)。
3. PCR反應(yīng)體系配制(試劑配制區(qū))
按以下比例配制(示例):
| 組分 | 體積(μL) |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置:預(yù)變性95℃ 3 min;40循環(huán)(95℃ 10 s, 60℃ 30 s);熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析:根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
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注意事項(xiàng):
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域:?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?,防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭,每步更換槍頭;
陽(yáng)性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行,避免污染其他試劑;
加樣后立即蓋緊管蓋,避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?,避免反復(fù)凍融,確保穩(wěn)定性;
使用前于冰上解凍并輕柔混勻,瞬時(shí)離心后使用。
關(guān)鍵字: 腸道病毒通用;PCR檢測(cè)試劑盒;
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