細(xì)胞簡(jiǎn)介
人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞Raji細(xì)胞由R.J.V.Pulvertaft于1963年從一名11歲黑人男性的左上頜骨的Burkitt's淋巴瘤中分離建系，是第一個(gè)人類造血系統(tǒng)的連續(xù)傳代細(xì)胞。Raji細(xì)胞表達(dá)B細(xì)胞抗原（CD19、CD20等），廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)研究、癌癥研究和抗癌藥物開(kāi)發(fā)。該細(xì)胞是非貼壁細(xì)胞，以單細(xì)胞或聚團(tuán)的形式懸浮生長(zhǎng)，可作轉(zhuǎn)染宿主，細(xì)胞中含有EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）DNA序列。
運(yùn)輸和保存
1．1 mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收貨后-80℃冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)揮發(fā)干凈、凍存管蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2．T25瓶培養(yǎng)的細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
培養(yǎng)瓶細(xì)胞接收后的處理
1．收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中靜置3-4 h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液體溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2．請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，10倍和20倍各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后依據(jù)。
3．細(xì)胞收貨脫落：若細(xì)胞在快遞運(yùn)輸途中因振動(dòng)脫落，先將培養(yǎng)瓶放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置3-6 h，讓少數(shù)脫落的細(xì)胞可再附著生長(zhǎng)。若仍有脫落聚集的細(xì)胞，則 (1) 收集所有細(xì)胞懸液，1000 rpm離心5 min，保留沉淀；(2) 添加胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化1-2 min左右；(3) 向離心管內(nèi)加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養(yǎng)基（補(bǔ)加1-5% FBS，促進(jìn)貼壁）重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；(5) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
4．收貨細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代：在顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，若細(xì)胞生長(zhǎng)密度在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中的灌液培養(yǎng)基，加入新配制的完全培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)80%-90%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。
5．運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用合適的新鮮培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
凍存細(xì)胞接收后的處理
收貨后-80℃冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇。
細(xì)胞復(fù)蘇：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖晃解凍，回溫后噴以75 %酒精并擦拭之，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。將凍存管中細(xì)胞加入到含4-6 mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶/6 cm培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)箱中孵育。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
培養(yǎng)信息
細(xì)胞名稱 | Raji，人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 |
別稱 | RAJI; P1-Raji; GM04671 |
種屬來(lái)源 | Homo sapiens, human，黑人，男性 |
組織來(lái)源 | 左上頜骨的Burkitt's淋巴瘤 |
細(xì)胞類型 | B淋巴細(xì)胞 |
疾病 | Burkitt's淋巴瘤 |
細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)特性 | 懸浮生長(zhǎng) Raji細(xì)胞通常在懸浮中以不同大小的浮動(dòng)簇生長(zhǎng)。隨著培養(yǎng)密度的增加，細(xì)胞簇可以變得非常大，盡管也可能存在一些單細(xì)胞。在這個(gè)細(xì)胞系中，碎片是正常的。 |
傳代比例 | 1:3-1:5，每2-3天傳代； ● 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞?？赏ㄟ^(guò)補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基或者離心換液兩種方式維持培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，建議傳代時(shí)使用“半換液法”對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有利，即直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)即可（1:2傳代）。 ● 剛復(fù)蘇后，細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)黑色細(xì)胞碎片，少量細(xì)胞碎片不影響細(xì)胞正常生長(zhǎng)。 ● 細(xì)胞濃度不應(yīng)超過(guò)2-3×106 cells/mL，應(yīng)加入足夠的培養(yǎng)基使細(xì)胞濃度降至3-5×105 cells/mL，并避免生長(zhǎng)培養(yǎng)基過(guò)度酸化。 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 | 10% FBS、RPMI 1640、1% Penicillin-Streptomycin |
培養(yǎng)條件 | 氣相：95% 空氣、5% CO2；溫度：37℃ |
凍存條件 | 90% FBS + 10% DMSO；液氮 |
生物安全等級(jí) | BSL-2 |
支原體檢測(cè) | 陰性 |
STR鑒定結(jié)果 | D3S1358: 15,16 TH01: 6,7 D21S11: 28,31 D18S51: 17 Penta_E: 5,13 D5S818: 10,13 D13S317: 13 D7S820: 10 D16S539: 8,11 CSF1PO: 10,12 Penta_D: 3.2,9 Amelogenin: X,Y vWA: 16,19 D8S1179: 14,15 TPOX: 8,13 FGA: 19,27 D19S433: 14,14.2 D2S1338: 22 |
注意事項(xiàng) | 該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液，請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。 |
關(guān)鍵字： Raji;B淋巴細(xì)胞;Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞;B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞;人;
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