基本信息?
產(chǎn)品名稱 | HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,無甘油) | 貨號 | P-PR1277 |
規(guī)格 | 1000U | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：HotStart RAPA3G DNA Polymerase (10U/ul, Glycerol-free)
作用機制：一種熱啟動DNA聚合酶，通過化學修飾或抗體結(jié)合，在低溫下無活性，升溫至PCR變性溫度時恢復活性，可有效減少非特異性擴增；同時具備較高的擴增效率和熱穩(wěn)定性，無甘油配方可避免對某些實驗體系的干擾。
適用樣本：各類DNA模板，包括基因組DNA、cDNA、質(zhì)粒DNA等，適用于常規(guī)PCR、高特異性PCR擴增實驗。
產(chǎn)品概述
一款不含甘油的熱啟動型DNA聚合酶，依托RAPA3G技術平臺研發(fā)，具備熱啟動活性，在低溫條件下酶活性被抑制，需經(jīng)過高溫激活后才發(fā)揮聚合功能，能有效降低非特異性擴增，提升PCR反應的特異性與靈敏度。該酶無甘油成分，避免了甘油對某些PCR反應體系或下游實驗的干擾，適用于對反應體系成分要求嚴苛的PCR擴增實驗，可應用于基因分型、突變檢測、常規(guī)DNA片段擴增等研究領域。
產(chǎn)品特點
熱啟動活性：依托RAPA3G技術平臺研發(fā)，具備熱啟動活性，在低溫條件下酶活性被抑制，需經(jīng)過高溫激活后才發(fā)揮聚合功能，有效降低非特異性擴增
無甘油干擾：不含甘油成分，避免了甘油對某些PCR反應體系或下游實驗的干擾
高特異性：大幅提升PCR反應的特異性與靈敏度
適用嚴苛體系：適用于對反應體系成分要求嚴苛的PCR擴增實驗，可應用于基因分型、突變檢測、常規(guī)DNA片段擴增等研究領域
核心PCR試劑及使用方法
1. Taq DNA聚合酶
作用：催化DNA鏈的延伸，是PCR反應的核心酶
使用方法：
通常按0.5-2U/25μL體系添加，具體用量參照試劑說明書
酶對溫度敏感，需在冰上操作，避免反復凍融
最后加入酶液，防止提前激活導致非特異性擴增
2. dNTP混合液
作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）
使用方法：
終濃度一般為200μmol/L每種dNTP，總濃度800μmol/L
避免反復凍融，可分裝成小體積儲存
注意pH值，過酸或過堿會抑制聚合酶活性
3. PCR緩沖液
作用：提供酶促反應的適宜環(huán)境（pH、離子濃度）
使用方法：
通常為10×濃度，使用時稀釋至1×終濃度
含Mg2+的緩沖液需注意Mg2+濃度，一般1.5-2.5mmol/L為最優(yōu)范圍
部分緩沖液含KCl、Tris-HCl等成分，無需額外添加
4. 引物（上游/下游）
作用：定位擴增區(qū)域，引導DNA合成起始
使用方法：
終濃度一般為0.1-1μmol/L，根據(jù)引物Tm值調(diào)整
引物需用TE緩沖液或無菌水溶解，濃度計算準確
避免引物降解，-20℃分裝儲存，避免反復凍融
5. 模板DNA
作用：提供擴增的原始DNA模板
使用方法：
模板濃度一般為1ng-1μg/25μL體系，根據(jù)模板類型調(diào)整
基因組DNA需充分純化，避免蛋白、RNA等雜質(zhì)污染
質(zhì)粒DNA可適當減少用量，一般10-100ng即可
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實驗流程
反應體系配制：按1×工作濃度混合預混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及無核酸酶水。
PCR程序：
預變性：95℃ 30 sec
擴增循環(huán)（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（熒光采集）
熔解曲線分析：60-95℃梯度升溫。
注意事項
避免反復凍融，推薦分裝保存。
熔解曲線需呈現(xiàn)單一峰以確保擴增特異性。
若需絕對定量，建議配套標準品使用。
關鍵字： HotStart RAPA3G DNA ;HotStart RAPA3G DNA ;
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