基本信息?
產(chǎn)品名稱 | HotStart Bst4.2 DNA/RNA聚合酶(8U/ul)無甘油 | 貨號 | P-PR1243 |
規(guī)格 | 1600U、10KU | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase (8U/ul, without glycerol)
作用機制：具有熱啟動特性，低溫下酶活性被抑制，高溫激活后表現(xiàn)出DNA聚合酶的鏈置換活性和反轉(zhuǎn)錄活性，可直接以RNA為模板進行cDNA合成和等溫擴增，無甘油配方適合特殊實驗體系。
適用樣本：適用于RNA病毒的檢測、RNA樣本的基因分析等，樣本包括臨床樣本、環(huán)境樣本、動植物組織等含RNA的樣本，尤其適合對特異性要求較高的實驗。
產(chǎn)品概述
無甘油配方的熱啟動型Bst 4.2多功能聚合酶，同時具備DNA聚合酶活性和反轉(zhuǎn)錄酶活性，可直接以RNA或DNA為模板進行等溫擴增。熱啟動特性使其在低溫下處于抑制狀態(tài)，升溫后激活，有效減少非特異性擴增，保證反應(yīng)的準確性。8U/ul的濃度保證了高效的催化能力，無甘油成分避免了對反應(yīng)體系的干擾，適用于RNA病毒檢測、復(fù)雜樣本的等溫擴增等實驗。
產(chǎn)品特點
熱啟動雙功能：熱啟動設(shè)計，同時具備DNA聚合酶和反轉(zhuǎn)錄酶活性
無甘油配方：避免甘油對反應(yīng)體系的干擾，適用于特殊實驗要求
高特異性：低溫下無活性，有效減少非特異性擴增
恒溫適配：65℃恒溫反應(yīng)，適用于等溫擴增和RNA病毒檢測
核心PCR試劑及使用方法
1. Taq DNA聚合酶
作用：催化DNA鏈的延伸，是PCR反應(yīng)的核心酶
使用方法：
通常按0.5-2U/25μL體系添加，具體用量參照試劑說明書
酶對溫度敏感，需在冰上操作，避免反復(fù)凍融
最后加入酶液，防止提前激活導(dǎo)致非特異性擴增
2. dNTP混合液
作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）
使用方法：
終濃度一般為200μmol/L每種dNTP，總濃度800μmol/L
避免反復(fù)凍融，可分裝成小體積儲存
注意pH值，過酸或過堿會抑制聚合酶活性
3. PCR緩沖液
作用：提供酶促反應(yīng)的適宜環(huán)境（pH、離子濃度）
使用方法：
通常為10×濃度，使用時稀釋至1×終濃度
含Mg2+的緩沖液需注意Mg2+濃度，一般1.5-2.5mmol/L為最優(yōu)范圍
部分緩沖液含KCl、Tris-HCl等成分，無需額外添加
4. 引物（上游/下游）
作用：定位擴增區(qū)域，引導(dǎo)DNA合成起始
使用方法：
終濃度一般為0.1-1μmol/L，根據(jù)引物Tm值調(diào)整
引物需用TE緩沖液或無菌水溶解，濃度計算準確
避免引物降解，-20℃分裝儲存，避免反復(fù)凍融
5. 模板DNA
作用：提供擴增的原始DNA模板
使用方法：
模板濃度一般為1ng-1μg/25μL體系，根據(jù)模板類型調(diào)整
基因組DNA需充分純化，避免蛋白、RNA等雜質(zhì)污染
質(zhì)粒DNA可適當(dāng)減少用量，一般10-100ng即可
公司正在出售的產(chǎn)品
單孢子蟲通用PCR試劑盒 | 羊痘病毒PCR檢測試劑盒 |
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β-黑色su細胞刺激suELISA試劑盒 | CD44變體6ELISA試劑盒 |
實驗流程
反應(yīng)體系配制：按1×工作濃度混合預(yù)混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及無核酸酶水。
PCR程序：
預(yù)變性：95℃ 30 sec
擴增循環(huán)（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（熒光采集）
熔解曲線分析：60-95℃梯度升溫。
注意事項
避免反復(fù)凍融，推薦分裝保存。
熔解曲線需呈現(xiàn)單一峰以確保擴增特異性。
若需絕對定量，建議配套標(biāo)準品使用。
關(guān)鍵字： HotStart Bst4.2 DNA/;
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