基本信息?
?中文名稱?：HS CUDG探針法熒光定量PCR試劑盒（防污染系統(tǒng)）
貨號：P-PR1428
規(guī)格：100反應(yīng)、200反應(yīng)、500反應(yīng)
?英文名稱?：HS CUDG Probe-based Quantitative PCR Kit (Contamination Prevention System)
作用機(jī)制：利用探針法熒光定量PCR原理，特異性探針與目標(biāo)DNA序列結(jié)合，在PCR擴(kuò)增過程中，Taq酶的5' - 3'外切酶活性切割探針，釋放熒光基團(tuán)產(chǎn)生熒光信號，熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增的DNA量成正比。防污染系統(tǒng)可有效抑制擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染，保證檢測準(zhǔn)確性。
適用樣本：基因組DNA、質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物等純化后的DNA樣本。
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法熒光定量PCR技術(shù)，搭配dUTP/UDG防污染系統(tǒng)，可高效檢測樣本中的靶基因，適用于土壤、糞便、腫瘤、血液等復(fù)雜樣本的科研檢測。
產(chǎn)品特點
高特異性：使用化學(xué)修飾的超級熱啟動聚合酶，有效避免非特異擴(kuò)增。
防污染設(shè)計：引入dUTP/UDG防污染系統(tǒng)，高效消除氣溶膠對PCR檢測的干擾。
強(qiáng)抗干擾能力：針對復(fù)雜樣本優(yōu)化反應(yīng)體系，可穩(wěn)定檢測土壤、糞便等難度較高的樣本。
穩(wěn)定性優(yōu)異：反應(yīng)體系經(jīng)充分驗證，適合試劑盒開發(fā)及批量檢測。
試劑盒組成
組件 規(guī)格 說明
2×HS CUDG Probe Mix 1ml/2ml 含熱啟動聚合酶、dNTP等
UDG酶（1U/μl） 20μl/50μl 防污染核心酶
探針混合液（10μM） 100μl 含特異性探針
引物混合液（10μM） 100μl 含上下游特異性引物
陽性對照 50μl 已知濃度的靶基因片段
無核酸酶水 1ml 用于體系配制及樣本稀釋
實驗步驟
一、樣本處理
采用常規(guī)核酸提取方法純化樣本DNA，推薦使用柱式提取試劑盒以保證純度。
核酸濃度建議調(diào)整至10-100ng/μl，OD260/280比值應(yīng)在1.8-2.0之間。
二、反應(yīng)體系配制（20μl體系）
在冰浴中按以下順序加入試劑：
試劑 體積 終濃度
2×HS CUDG Probe Mix 10μl 1×
UDG酶（1U/μl） 0.2μl 0.01U/μl
引物混合液（10μM） 0.4μl 0.2μM
探針混合液（10μM） 0.2μl 0.1μM
模板DNA 2μl 20-200ng
無核酸酶水 補(bǔ)至20μl -
三、PCR擴(kuò)增程序
UDG預(yù)處理：50℃ 2分鐘（降解殘留的dU-DNA）
預(yù)變性：95℃ 3分鐘（激活熱啟動聚合酶）
循環(huán)擴(kuò)增（40個循環(huán)）：
95℃ 15秒（變性）
60℃ 30秒（退火+延伸，收集熒光信號）
四、結(jié)果分析
以陽性對照的濃度為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)樣本Ct值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算靶基因初始拷貝數(shù)。
Ct值＞38判定為陰性，需結(jié)合溶解曲線及重復(fù)實驗確認(rèn)結(jié)果。
注意事項
防污染操作：
實驗需在獨立的試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)及擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行，避免交叉污染。
所有移液器吸頭使用帶濾芯產(chǎn)品，操作過程中勤換手套。
試劑配制完成后，需在樣本處理區(qū)加入模板DNA，嚴(yán)禁返回試劑區(qū)。
試劑保存：
2×HS CUDG Probe Mix、UDG酶需-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
引物/探針混合液可-20℃長期保存，或4℃短期存放（1個月內(nèi)）。
優(yōu)化建議：
若出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，可適當(dāng)提高退火溫度（1-2℃）。
若Ct值偏高，可增加模板量至5μl，或優(yōu)化樣本提取方法以提高核酸純度。
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關(guān)鍵字： HS CUDG探針法熒光定量PCR試劑盒;HS CUDG Probe-based ;
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