基本信息?
?中文名稱?：UDG多重探針法熒光定量PCR試劑盒（防污染系統(tǒng)）
貨號：P-PR1429
規(guī)格：100反應、200反應、500反應
?英文名稱?：UDG Multiplex Probe-based Quantitative PCR Kit (Contamination Prevention System)
作用機制：在多重熒光定量PCR體系中引入尿嘧啶-DNA糖基化酶（UDG），可降解含有尿嘧啶的擴增產(chǎn)物（如之前實驗殘留的PCR產(chǎn)物），避免交叉污染；同時利用不同熒光標記的探針特異性識別不同靶基因，實現(xiàn)多重定量檢測。
適用樣本：血液、體液、組織、拭子等提取的核酸樣本，適用于病原體檢測、基因表達分析等。
產(chǎn)品簡介
本試劑盒專為核酸定量檢測設(shè)計，采用多重TaqMan探針法，搭配UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）防污染系統(tǒng)，解決PCR實驗中氣溶膠交叉污染導致假陽性的行業(yè)痛點。試劑盒組成完整，包含2×Multiplex Probe Master Mix、UDG酶、dUTP混合液、ROX參考染料等核心組分，可滿足多次多重檢測需求，無需額外搭配基礎(chǔ)試劑。
核心優(yōu)勢
防污染能力強：UDG酶+dUTP底物雙重防污染機制，反應前可特異性降解含尿嘧啶的殘留PCR產(chǎn)物，徹底消除氣溶膠污染干擾
多重檢測效率高：優(yōu)化的反應體系支持同時檢測3-5個靶標基因，各通道熒光信號無交叉串擾，大幅提升檢測通量
特異性與靈敏度兼顧：采用化學修飾的熱啟動Taq酶，結(jié)合TaqMan探針的序列特異性識別，有效避免非特異性擴增；最低檢測限可達到5拷貝/反應，適合低豐度樣本檢測
兼容性廣：適配主流熒光定量PCR儀器，無需調(diào)整ROX染料濃度，反應體系可兼容血清、血漿、組織勻漿等多種復雜樣本
試劑盒組成（以100T規(guī)格為例）
組分 規(guī)格 保存條件
2×Multiplex Probe Master Mix 5mL -20℃避光保存
UDG酶（1U/μL） 100μL -20℃保存
dUTP混合液（10mM） 200μL -20℃保存
ROX參考染料（50×） 100μL 4℃避光保存
無核酸酶水 5mL -20℃保存
注：所有組分無核酸酶殘留，僅用于科研；UDG酶避免反復凍融，建議分裝為20μL/管保存
實驗操作步驟
一、實驗前準備
將試劑盒各組分置于冰上融化，充分混勻后短暫離心收集液體
準備無核酸酶的PCR反應管、槍頭及離心管，實驗全程在超凈工作臺中進行
根據(jù)待檢測靶標數(shù)量，設(shè)計對應的TaqMan探針和引物序列（需提前驗證特異性）
二、多重PCR反應體系配制（20μL體系）
試劑組分 體積（μL）
2×Multiplex Probe Master Mix 10
UDG酶（1U/μL） 0.2
dUTP混合液（10mM） 0.4
ROX參考染料（50×） 0.4
上游引物1（10μM） 0.4
下游引物1（10μM） 0.4
探針1（10μM） 0.2
*上游引物2（10μM） 0.4
*下游引物2（10μM） 0.4
*探針2（10μM） 0.2
模板DNA/RNA 2-5
無核酸酶水 補至20
注：帶為可選組分，根據(jù)靶標數(shù)量添加，最多可同時添加5組引物探針
三、PCR反應程序設(shè)置
防污染預處理：50℃ 2分鐘（UDG酶降解含尿嘧啶的污染產(chǎn)物）
預變性：95℃ 10分鐘（激活熱啟動Taq酶）
循環(huán)擴增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集熒光信號），40個循環(huán)
反應結(jié)束：4℃保溫，可直接導出熒光數(shù)據(jù)進行分析
注意事項
防污染操作：實驗分區(qū)進行（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)），避免交叉污染；使用帶濾芯的槍頭，反應管蓋緊后再轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)
模板質(zhì)量控制：DNA模板需無RNA和蛋白污染，RNA模板需確保無基因組DNA殘留，建議使用DNase I處理樣本
探針引物設(shè)計：探針Tm值需高于引物Tm值5-10℃，不同靶標探針需標記不同熒光基團（如FAM、VIC、CY5等），避免光譜重疊
反應條件優(yōu)化：復雜樣本可將退火溫度調(diào)整為58-62℃梯度優(yōu)化，或適當調(diào)整引物探針濃度
試劑保存：UDG酶對溫度敏感，避免室溫放置超過30分鐘；所有試劑需-20℃避光保存，建議小份分裝使用
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關(guān)鍵字： UDG多重探針法熒光定量PCR試劑盒（防;UDG Multiplex Probe-;
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