基本信息?

?中文名稱?：超級多重?zé)晒舛?/span>PCR試劑盒（探針）

貨號：P-PR1426

規(guī)格：100反應(yīng)、200反應(yīng)、500反應(yīng)

?英文名稱?：Super Multiplex Quantitative PCR Kit (Probe-based)
作用機制：優(yōu)化的PCR反應(yīng)體系搭配多種熒光標(biāo)記的探針，可在同一反應(yīng)管中同時對多個靶基因進行擴增和熒光檢測，提高檢測通量；特殊的熱啟動聚合酶增強了反應(yīng)的特異性和靈敏度。 

適用樣本：核酸提取物，可用于病原體高通量檢測、基因表達譜分析等。
產(chǎn)品簡介

本試劑盒專為多重?zé)晒舛?/span>PCR檢測設(shè)計，采用探針法（兼容TaqMan?、Scorpions?等探針類型），可同時對多個靶標(biāo)基因進行精準(zhǔn)定量檢測。試劑盒以預(yù)混液形式提供，搭配優(yōu)化的超級熱啟動聚合酶與反應(yīng)緩沖液，能在復(fù)雜樣本中實現(xiàn)高特異性、高靈敏度的基因擴增，40個循環(huán)僅需20多分鐘即可完成，適用于基因表達分析、病原體檢測、SNP分型等多種分子生物學(xué)實驗。

產(chǎn)品特點

多重檢測能力：可同時檢測2-10個靶標(biāo)基因，大幅提升實驗效率

超高特異性：超級熱啟動酶結(jié)合探針雜交技術(shù)，有效降低非特異性擴增

快速高效：優(yōu)化的反應(yīng)體系使40個循環(huán)擴增僅需20-25分鐘

高靈敏度：最低可檢測1pg總RNA或10拷貝的靶基因

抗干擾性強：適配土壤、糞便、血液等復(fù)雜樣本，重復(fù)性好

操作便捷：預(yù)混液形式包裝，無需復(fù)雜試劑配制

試劑盒組成

組分名稱 規(guī)格（以100次反應(yīng)裝為例）

2×超級多重PCR預(yù)混液 1.25ml × 8

ROX校正染料（50×） 50μL

無核酸酶水 10ml

陽性對照（可選） 100μL

陰性對照（可選） 100μL

實驗操作步驟

樣本準(zhǔn)備

核酸提?。翰捎煤线m方法提取樣本中的DNA或RNA，確保核酸無降解、無抑制劑污染

RNA樣本處理：若樣本為RNA，需先反轉(zhuǎn)錄為cDNA（推薦使用本品牌逆轉(zhuǎn)錄試劑盒）

樣本定量：用分光光度計或Qubit測定核酸濃度，將所有樣本統(tǒng)一稀釋至10-100ng/μL

反應(yīng)體系配制

在冰上配制PCR反應(yīng)體系，每個反應(yīng)體系體積推薦為20μL：

試劑組分 體積（20μL體系）

2×超級多重PCR預(yù)混液 10μL

ROX校正染料（50×） 0.4μL

上游引物混合物（10μM） 0.8μL

下游引物混合物（10μM） 0.8μL

探針混合物（10μM） 0.4-0.8μL

模板DNA/cDNA 2μL

無核酸酶水 補足至20μL

注：引物和探針的終濃度需根據(jù)靶標(biāo)基因數(shù)量和特異性進行優(yōu)化，推薦終濃度為0.2-0.4μM

上機擴增

將配制好的反應(yīng)管放入熒光定量PCR儀，設(shè)置如下擴增程序：

預(yù)變性與酶激活：95℃ 10分鐘（激活熱啟動酶）

PCR循環(huán)（40個循環(huán)）：

變性：95℃ 15秒

退火延伸：60℃ 1分鐘（采集熒光信號）

注：若靶標(biāo)基因Tm值差異較大，可采用 touchdown PCR 程序或分兩步進行退火延伸

結(jié)果分析

基線設(shè)置：將基線設(shè)置在3-15個循環(huán)的熒光信號范圍內(nèi)

閾值設(shè)置：將閾值線設(shè)置在擴增曲線的指數(shù)增長期

數(shù)據(jù)分析：

絕對定量：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本中靶基因的初始拷貝數(shù)

相對定量：采用ΔΔCt法計算不同樣本間基因表達量的差異

多重檢測：需確保各探針的熒光通道無交叉干擾

注意事項

試劑盒所有組分需在-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融；ROX校正染料可在2-8℃短期保存

實驗操作需在無核酸酶環(huán)境中進行，使用無菌無酶的吸頭和離心管

引物和探針需經(jīng)PAGE或HPLC純化，稀釋后在-20℃分裝保存

若樣本中含有PCR抑制劑（如血紅素、腐殖酸等），需對樣本進行純化或適當(dāng)稀釋

多重檢測時需優(yōu)化引物和探針濃度，避免引物二聚體和通道間干擾

每次實驗需設(shè)置陰性對照（無模板）和陽性對照（已知濃度的靶基因）

公司正在出售的產(chǎn)品