基本信息?
產(chǎn)品名稱 | Bst 2.0 DNA/RNA polymerase | 貨號 | P-PR1117 |
規(guī)格 | 1600U | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Bst 2.0 DNA/RNA Polymerase
作用機(jī)制：一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶，同時具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，可以DNA或RNA為模板，催化DNA鏈的5'到3'方向合成，無需高溫變性，可在等溫條件下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，如環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（LAMP）。
適用樣本：單鏈或雙鏈DNA模板、RNA模板，適用于等溫擴(kuò)增實驗，如LAMP、RT-LAMP等，尤其適合現(xiàn)場快速檢測。
產(chǎn)品概述
這是一種具有DNA聚合酶活性和反轉(zhuǎn)錄活性的酶，來源于嗜熱菌Bacillus stearothermophilus，具有強(qiáng)大的鏈置換活性，能夠在恒溫條件下高效擴(kuò)增DNA或RNA模板。它無需進(jìn)行溫度循環(huán)，適用于恒溫擴(kuò)增技術(shù)（如LAMP），可用于快速檢測病原體、基因分型、現(xiàn)場快速診斷等場景，為核酸檢測提供了一種簡便、快速、靈敏的方法，尤其適合資源有限或需要快速出結(jié)果的環(huán)境。
產(chǎn)品特點(diǎn)
雙酶活性兼具：同時具備DNA聚合酶活性和反轉(zhuǎn)錄酶活性，可直接以RNA為模板擴(kuò)增
強(qiáng)鏈置換能力：高效置換DNA鏈，無需熱循環(huán)，適用于等溫擴(kuò)增技術(shù)
恒溫擴(kuò)增優(yōu)勢：65℃恒溫條件下即可快速擴(kuò)增，無需PCR儀
長片段合成：可合成長達(dá)10kb的DNA片段，適用于復(fù)雜模板擴(kuò)增
實驗前準(zhǔn)備
試劑與耗材檢查：確認(rèn)PCR預(yù)混液、上下游引物、模板DNA、無酶水等試劑在有效期內(nèi)，外觀無渾濁、沉淀；PCR管、槍頭需為無酶無菌規(guī)格。
儀器預(yù)熱：提前10-15分鐘啟動PCR儀，設(shè)置好反應(yīng)程序，確保儀器達(dá)到預(yù)設(shè)溫度。
環(huán)境準(zhǔn)備：在超凈工作臺內(nèi)操作，佩戴無粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭臺面和移液器。
反應(yīng)體系配制
冰上操作：將所有試劑放置于冰盒內(nèi)，避免酶失活。
體系配比（以25μL體系為例）：
PCR預(yù)混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL
上游引物（10μM）：1μL
下游引物（10μM）：1μL
模板DNA：1-5μL（根據(jù)模板濃度調(diào)整）
無酶水：補(bǔ)足至25μL
輕柔混勻：用移液器輕輕吹吸混合液3-5次，避免產(chǎn)生氣泡；若有氣泡可短暫離心去除。
分裝體系：將配制好的反應(yīng)液分裝至PCR管中，每管25μL，蓋緊管蓋。
PCR儀上機(jī)反應(yīng)
程序設(shè)置：根據(jù)引物Tm值和實驗需求設(shè)置三步法或兩步法程序：
預(yù)變性：95℃，3-5分鐘
循環(huán)階段：95℃變性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根據(jù)片段長度調(diào)整，1kb約1分鐘），循環(huán)25-35次
終延伸：72℃，5-10分鐘
保溫：4℃。
上機(jī)運(yùn)行：將PCR管放入PCR儀樣品槽，確保管蓋緊密貼合；啟動程序，等待反應(yīng)完成。
公司正在出售的產(chǎn)品
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注意事項
無菌操作：所有試劑和耗材需高壓滅菌或無菌處理，避免外源DNA污染
溫度控制：酶、dNTP等試劑需-20℃儲存，避免反復(fù)凍融
體系優(yōu)化：根據(jù)引物Tm值、模板類型調(diào)整Mg2+濃度和退火溫度
對照設(shè)置：每次實驗需設(shè)置陰性對照（無模板）和陽性對照（已知陽性模板）
關(guān)鍵字： Bst 2.0 DNA/RNA poly;
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