基本信息?
產品名稱 | Bst 2.0 DNA/RNA polymerase | 貨號 | P-PR1117 |
規(guī)格 | 1600U | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Bst 2.0 DNA/RNA Polymerase
作用機制：一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶，同時具有逆轉錄酶活性，可以DNA或RNA為模板，催化DNA鏈的5'到3'方向合成，無需高溫變性，可在等溫條件下進行擴增反應，如環(huán)介導等溫擴增（LAMP）。
適用樣本：單鏈或雙鏈DNA模板、RNA模板，適用于等溫擴增實驗，如LAMP、RT-LAMP等，尤其適合現場快速檢測。
產品概述
這是一種具有DNA聚合酶活性和反轉錄活性的酶，來源于嗜熱菌Bacillus stearothermophilus，具有強大的鏈置換活性，能夠在恒溫條件下高效擴增DNA或RNA模板。它無需進行溫度循環(huán)，適用于恒溫擴增技術（如LAMP），可用于快速檢測病原體、基因分型、現場快速診斷等場景，為核酸檢測提供了一種簡便、快速、靈敏的方法，尤其適合資源有限或需要快速出結果的環(huán)境。
產品特點
雙酶活性兼具：同時具備DNA聚合酶活性和反轉錄酶活性，可直接以RNA為模板擴增
強鏈置換能力：高效置換DNA鏈，無需熱循環(huán)，適用于等溫擴增技術
恒溫擴增優(yōu)勢：65℃恒溫條件下即可快速擴增，無需PCR儀
長片段合成：可合成長達10kb的DNA片段，適用于復雜模板擴增
實驗前準備
試劑與耗材檢查：確認PCR預混液、上下游引物、模板DNA、無酶水等試劑在有效期內，外觀無渾濁、沉淀；PCR管、槍頭需為無酶無菌規(guī)格。
儀器預熱：提前10-15分鐘啟動PCR儀，設置好反應程序，確保儀器達到預設溫度。
環(huán)境準備：在超凈工作臺內操作，佩戴無粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭臺面和移液器。
反應體系配制
冰上操作：將所有試劑放置于冰盒內，避免酶失活。
體系配比（以25μL體系為例）：
PCR預混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL
上游引物（10μM）：1μL
下游引物（10μM）：1μL
模板DNA：1-5μL（根據模板濃度調整）
無酶水：補足至25μL
輕柔混勻：用移液器輕輕吹吸混合液3-5次，避免產生氣泡；若有氣泡可短暫離心去除。
分裝體系：將配制好的反應液分裝至PCR管中，每管25μL，蓋緊管蓋。
PCR儀上機反應
程序設置：根據引物Tm值和實驗需求設置三步法或兩步法程序：
預變性：95℃，3-5分鐘
循環(huán)階段：95℃變性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根據片段長度調整，1kb約1分鐘），循環(huán)25-35次
終延伸：72℃，5-10分鐘
保溫：4℃。
上機運行：將PCR管放入PCR儀樣品槽，確保管蓋緊密貼合；啟動程序，等待反應完成。
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注意事項
無菌操作：所有試劑和耗材需高壓滅菌或無菌處理，避免外源DNA污染
溫度控制：酶、dNTP等試劑需-20℃儲存，避免反復凍融
體系優(yōu)化：根據引物Tm值、模板類型調整Mg2+濃度和退火溫度
對照設置：每次實驗需設置陰性對照（無模板）和陽性對照（已知陽性模板）
關鍵字： Bst 2.0 DNA/RNA poly;
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