基本信息?
?中文名稱?：去內毒素中大量質粒富集提取試劑盒
貨號：P-PR1494
規(guī)格：40T、60T
?英文名稱?：Endotoxin-free Mid-scale Plasmid Enrichment and Extraction Kit
作用機制：在質粒提取過程中，通過特殊的試劑和步驟去除革蘭氏陰性菌產生的內毒素，同時實現(xiàn)質粒的大量富集，得到高純度、無內毒素的質粒DNA，適用于細胞轉染、基因治療等對質粒質量要求高的實驗。
適用樣本：大腸桿菌等細菌培養(yǎng)物中的質粒。
產品概述
本試劑盒專門用于從細菌培養(yǎng)物中大量提取并富集去除內毒素的質粒DNA。采用獨特的內毒素清除技術，可高效去除質粒制備過程中殘留的內毒素，獲得的質粒DNA內毒素含量極低，可直接用于細胞轉染、基因治療、動物實驗等對內毒素敏感的實驗。
產品組成
組分名稱 規(guī)格 保存條件
溶液P1（重懸液） 100mL 常溫干燥保存
溶液P2（裂解液） 100mL 常溫干燥保存
溶液P3（中和液） 120mL 常溫干燥保存
內毒素清除劑 100mL 2 - 8℃保存
結合液 250mL 常溫干燥保存
洗滌液1 100mL 常溫干燥保存
洗滌液2 150mL 常溫干燥保存
洗脫液 50mL 常溫干燥保存
RNase A（10mg/mL） 1mL -20℃保存
質粒純化柱 10個 常溫干燥保存
收集管（50mL） 10個 常溫干燥保存
產品特點
高效去內毒素：采用獨特的內毒素清除技術，內毒素去除率高達99.9%，獲得的質粒DNA內毒素含量＜1EU/μg，滿足嚴格的實驗要求。
高產量與高純度：從50 - 250mL細菌培養(yǎng)液中可提取1 - 3mg高質量質粒DNA，A260/A280比值在1.8 - 2.0之間，A260/A230比值≥2.0，純度等同于2×CsCl梯度離心。
操作簡便快速：無需苯酚/氯仿抽提和乙醇沉淀，整個提取過程約60分鐘即可完成。
適用性廣：適用于各種革蘭氏陰性菌，包括高拷貝和低拷貝質粒的提取。
安全環(huán)保：不使用有毒有害試劑，實驗過程更安全，廢棄物處理更環(huán)保。
操作步驟
一、溶液制備（首次使用前）
將1mL RNase A（10mg/mL）全部加入溶液P1中，充分混勻后置于2 - 8℃保存。
向洗滌液2中加入60mL 100%乙醇，充分混勻后常溫保存。
二、細菌培養(yǎng)與收集
將含有目標質粒的大腸桿菌接種到含有相應抗生素的LB培養(yǎng)基中，37℃、220rpm振蕩培養(yǎng)過夜（12 - 16小時）。
取50 - 250mL過夜培養(yǎng)的菌液，于4℃、6000×g離心10分鐘，棄盡上清液。
三、質粒提取
重懸細菌：向菌體沉淀中加入10mL溶液P1（已加入RNase A），用移液器輕輕吹打，使菌體沉淀完全重懸。
裂解細菌：加入10mL溶液P2，溫和地上下顛倒離心管6 - 8次，充分混勻，室溫放置5 - 10分鐘，使菌體充分裂解，溶液變得清亮粘稠。
中和裂解液：加入12mL溶液P3，立即溫和地上下顛倒離心管10 - 12次，充分混勻，此時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。于4℃、12000×g離心15分鐘。
內毒素清除：將上清液轉移至新的離心管中，加入10mL內毒素清除劑，溫和顛倒混勻，室溫放置10分鐘，期間每3分鐘顛倒混勻一次。
結合質粒：加入25mL結合液，充分混勻，將混合液分批次加入到質粒純化柱中（每次加入15 - 20mL），于室溫、6000×g離心2分鐘，棄掉收集管中的廢液。
洗滌純化柱：向質粒純化柱中加入15mL洗滌液1，室溫、6000×g離心2分鐘，棄掉收集管中的廢液。
向質粒純化柱中加入15mL洗滌液2（已加入乙醇），室溫、6000×g離心2分鐘，棄掉收集管中的廢液。重復此步驟一次。
干燥純化柱：將質粒純化柱置于新的收集管中，室溫、12000×g離心5分鐘，徹底去除純化柱中殘留的洗滌液。
洗脫質粒：將質粒純化柱置于干凈的50mL離心管中，向純化柱膜中央加入5 - 10mL預熱至65℃的洗脫液，室溫放置5分鐘，于室溫、6000×g離心5分鐘，收集離心管中的溶液，即為高純度、無內毒素的質粒DNA。
注意事項
溶液保存：溶液P2在低溫下可能會出現(xiàn)SDS沉淀，可在37℃水浴中加熱幾分鐘使其溶解，冷卻至室溫后使用。
操作規(guī)范：所有操作均需在無菌環(huán)境下進行，使用無菌移液器頭和離心管，避免外源DNA和RNA的污染。
安全防護：溶液P3和結合液中含有刺激性化合物，操作時請佩戴乳膠手套和護目鏡，避免接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸，立即用大量清水沖洗。
質粒產量影響因素：質粒的提取量與細菌培養(yǎng)密度、質?？截悢?shù)、培養(yǎng)條件等因素有關。為獲得最佳提取效果，建議將菌液OD600值控制在1.2 - 1.5之間。
洗脫液選擇：使用預熱至65℃的洗脫液可提高質粒的洗脫效率。也可使用無菌水作為洗脫液，但質粒的洗脫效率可能會略有降低。
質粒保存：提取的質粒DNA可置于-20℃長期保存，避免反復凍融。
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關鍵字： 去內毒素中大量質粒富集提取試劑盒;Endotoxin-free Mid-s;
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