基本信息?

?英文名稱?：RTS BL21(DE3) Chaperone-Enhanced Expression Competent Cells
作用機制：在BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中共表達(dá)分子伴侶（如GroEL/GroES、DnaK/DnaJ），幫助重組蛋白正確折疊，減少蛋白聚集與包涵體形成；細(xì)胞含T7 RNA聚合酶基因，可通過IPTG誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá)。 

適用樣本：重組蛋白的原核表達(dá)，尤其適用于表達(dá)易形成包涵體的難溶性蛋白。
產(chǎn)品概述
RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞是一種經(jīng)過基因工程改造的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，專門用于重組蛋白的可溶性表達(dá)。BL21(DE3)是常用的蛋白表達(dá)宿主菌株，其染色體上整合有T7 RNA聚合酶基因，可通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)T7 RNA聚合酶，進而驅(qū)動帶有T7啟動子的表達(dá)載體上目的基因的表達(dá)。該感受態(tài)細(xì)胞還共表達(dá)分子伴侶（Chaperone），分子伴侶能夠輔助重組蛋白進行正確折疊，有效減少蛋白在表達(dá)過程中形成包涵體的概率，提高可溶性蛋白的表達(dá)量。它適用于表達(dá)那些易形成包涵體、難溶性的重組蛋白，尤其適用于膜蛋白、多亞基蛋白復(fù)合體等復(fù)雜蛋白的表達(dá)。感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率高，操作簡便，為重組蛋白的可溶性表達(dá)研究提供了有力的工具。
產(chǎn)品特點
分子伴侶共表達(dá)：共表達(dá)多種分子伴侶（如GroEL/GroES、DnaK/DnaJ/GrpE等），輔助重組蛋白正確折疊。

顯著提高可溶性：使難溶性蛋白、膜蛋白的可溶性表達(dá)量提高5-50倍，減少包涵體形成。

高效蛋白表達(dá)：基于BL21(DE3)菌株，T7啟動子介導(dǎo)高效表達(dá)，蛋白表達(dá)量可達(dá)菌體總蛋白的30%以上。

操作簡便：與常規(guī)BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞操作流程一致，無需改變蛋白表達(dá)實驗流程。
操作步驟

一、樣本準(zhǔn)備

取1-5mL漱口水樣本轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，12000rpm離心10分鐘，棄上清，收集細(xì)胞沉淀。

二、細(xì)胞裂解

向離心管中加入200~400μL細(xì)胞裂解液，再加入15~20μL蛋白酶K溶液

渦旋震蕩10秒充分混勻，將離心管放入75℃恒溫震蕩器中，900rpm恒溫震蕩裂解45分鐘

裂解完成后短暫離心，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中

三、DNA吸附

向裂解上清中加入等體積的結(jié)合緩沖液，輕輕顛倒混勻

將混合液全部轉(zhuǎn)移至一次性吸附柱中，12000rpm離心30秒，棄收集管中的廢液

向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm離心30秒，棄廢液；重復(fù)此漂洗步驟1次

四、DNA洗脫

將吸附柱放回收集管，12000rpm離心2分鐘，徹底去除殘留漂洗液

將吸附柱轉(zhuǎn)移至新的1.5mL離心管中，向吸附柱中心加入50~100μL洗脫緩沖液（可預(yù)熱至65℃提升洗脫效率）

室溫靜置2分鐘，12000rpm離心1分鐘，離心管中的液體即為提取完成的基因組DNA

公司正在出售的產(chǎn)品

使用建議

溶解與保存：建議以液體形式保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

反應(yīng)條件：常規(guī)反應(yīng)溫度為37℃，滅活需50℃處理5分鐘。

推薦用量：根據(jù)實驗體系優(yōu)化，通常每50μL反應(yīng)體系添加0.1-1U。