基本信息?
產品名稱 | ssDNA/RNA環(huán)化連接酶 | 貨號 | P-PR1325 |
規(guī)格 | 2000U、20KU | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：ssDNA/RNA Circularization Ligase
作用機制：催化單鏈DNA或RNA分子的自身連接，形成環(huán)狀DNA或RNA分子；通過識別單鏈核酸的5'端與3'端，催化磷酸二酯鍵的形成，實現(xiàn)單鏈核酸的環(huán)化。
適用樣本：單鏈DNA或RNA分子的環(huán)化，適用于RNA沉默、基因調控、環(huán)化RNA文庫構建等實驗。
產品概述
ssDNA/RNA環(huán)化連接酶是一類能夠催化單鏈DNA（ssDNA）或單鏈RNA（ssRNA）分子自身環(huán)化的連接酶。它可識別單鏈核酸分子的5'磷酸基團與3'羥基，并催化兩者之間形成磷酸二酯鍵，使線性的單鏈核酸分子環(huán)化為環(huán)狀分子。這類連接酶在分子生物學研究中有多種應用，如環(huán)狀DNA文庫構建、環(huán)狀RNA研究、核酸探針標記、核酸結構與功能研究等。不同來源的ssDNA/RNA環(huán)化連接酶可能具有不同的酶學特性，如底物特異性、反應條件、環(huán)化效率等。例如，有些連接酶僅對ssDNA有活性，有些則可同時作用于ssDNA與ssRNA；有些需要ATP作為輔助因子，有些則不需要。ssDNA/RNA環(huán)化連接酶為單鏈核酸的環(huán)化修飾與功能研究提供了關鍵的技術工具。
產品特點
熱穩(wěn)定性優(yōu)異：在60-65℃高溫條件下仍能保持高效活性，適合復雜核酸分子的連接反應。
底物兼容性廣：可催化單鏈DNA/RNA分子內環(huán)化及分子間連接，對>15nt的單鏈底物連接效率更高。
不依賴ATP：反應無需ATP提供能量，僅需Mn2+作為輔助因子，降低了反應體系復雜度。
堿基選擇性：5'末端連接效率G>A>>>T(U)>>>C，3'末端連接效率T(U)>A>G，3'端為C時幾乎無連接產物。
多功能催化：可催化核酸分子與預腺苷化接頭連接，ATP過量時還能使核酸分子腺苷化。
操作步驟
一、試劑預處理
取出洗滌液Ⅰ和洗滌液Ⅱ濃縮液，按試劑瓶標注比例加入無水乙醇，充分混勻后備用
將洗脫液置于65℃水浴鍋中預熱
二、水樣處理與核酸富集
取10mL預處理后的水樣（雜質較多的水樣需先經0.45μm濾膜過濾）加入50mL潔凈燒杯
依次加入0.5mL核酸富集因子、5mL病毒裂解液及50μL消化液，充分攪拌混勻
將燒杯置于65℃水浴中孵育15分鐘，期間每隔5分鐘攪拌一次
三、核酸純化與洗脫
向燒杯中加入15mL異丙醇，充分攪拌混勻后，將混合液轉移至連接富集吸附柱的50mL注射器針筒內
靜置2分鐘后，開啟真空抽濾裝置，將液體緩慢抽濾至富集吸附柱內（注意不要抽干）
向針筒內加入5mL洗滌液Ⅰ，靜置2分鐘后抽濾；再加入5mL洗滌液Ⅱ，靜置2分鐘后抽濾，重復洗滌液Ⅱ步驟1次
取下富集吸附柱，放入收集管中，12000rpm常溫離心3分鐘，去除殘留洗滌液
將吸附柱轉移至新的收集管，加入50-100μL預熱的洗脫液，靜置2分鐘后12000rpm離心2分鐘
收集管中的液體即為純化后的病毒核酸，可直接用于下游實驗或-70℃保存
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注意事項
試劑保存：試劑盒應避光保存于2-8℃，有效期12個月；核酸富集因子避免反復凍融，使用后立即放回冰箱
水樣預處理：高濁度或雜質過多的水樣，需先經0.45μm濾膜過濾，避免堵塞吸附柱
操作規(guī)范：實驗全程佩戴手套、口罩、護目鏡等防護用品，避免直接接觸水樣與試劑；若不慎接觸皮膚或眼睛，立即用大量清水沖洗
試劑配制：洗滌液需現(xiàn)用現(xiàn)配，按比例加入無水乙醇后充分混勻，未使用的稀釋液可在2-8℃保存1個月
核酸保存：提取的核酸若長期保存，需置于-70℃環(huán)境，避免反復凍融；短期可在4℃保存24小時
器材要求：所有實驗器材需為無RNA酶耗材，實驗前可經180℃干烤6小時或用RNA酶清除劑處理
關鍵字： ssDNA/RNA環(huán)化連接酶;ssDNA/RNA Circulariz;
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