基本信息?
產品名稱 | Taq DNA連接酶 | 貨號 | P-PR1328 |
規(guī)格 | 1000U、10KU | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Taq DNA Ligase
作用機制：一種熱穩(wěn)定的DNA連接酶，在高溫條件下催化DNA分子之間的磷酸二酯鍵形成；可連接具有同源序列的DNA片段，常用于DNA連接酶鏈式反應（LCR）、基因分型等實驗。
適用樣本：DNA片段的連接、基因分型、DNA甲基化檢測等實驗，尤其適用于高溫條件下的連接反應。
產品概述
Taq DNA連接酶是從嗜熱細菌Thermus aquaticus（Taq）中分離得到的一種熱穩(wěn)定DNA連接酶，能夠在高溫條件下催化雙鏈DNA片段末端的磷酸二酯鍵形成。它可識別并連接帶有互補粘性末端的DNA片段，且需要NAD+作為輔助因子。Taq DNA連接酶具有熱穩(wěn)定性，在高溫（如94℃）條件下仍保持活性，這一特性使其在聚合酶鏈式反應（PCR）相關的實驗中具有獨特應用，如連接酶鏈式反應（LCR）、實時熒光定量PCR中的探針連接檢測、基因分型等。在LCR中，Taq DNA連接酶可在高溫循環(huán)條件下反復催化互補引物的連接，實現靶序列的擴增與檢測。此外，它也可用于常規(guī)的DNA連接反應，但相比T4 DNA連接酶，其連接平末端的效率較低。Taq DNA連接酶為高溫條件下的DNA連接與分子檢測提供了重要的工具。
產品特點
熱穩(wěn)定性極強：耐受94℃高溫處理，適合PCR相關的高溫循環(huán)反應，如連接酶鏈式反應（LCR）。
NAD+依賴型：以NAD+作為能量輔助因子，而非ATP，適合特定的反應體系需求。
粘性末端偏好：對互補粘性末端的連接效率遠高于平末端，連接準確性高。
基因分型利器：在SNP檢測、基因突變分析等基因分型實驗中具有獨特優(yōu)勢。
反應速度快：在65℃條件下連接反應可在數分鐘內完成，實驗效率高。
操作步驟
一、實驗前準備
向漂洗液1中加入60mL無水乙醇，向漂洗液2中加入45mL無水乙醇，充分混勻后標記
載體RNA溶液配制：向300μg載體RNA凍干粉中加入300μL無酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分裝后-20℃保存
將冷凍樣本置于室溫解凍，輕輕顛倒混勻后備用
二、手工提取流程
樣本裂解：取200μL血液樣本至1.5mL離心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解緩沖液，振蕩混勻10秒，室溫孵育10分鐘（每3分鐘顛倒混勻1次）
磁珠結合：加入15μL磁珠懸浮液（使用前充分振蕩混勻），振蕩混勻10秒，室溫孵育10分鐘（每3分鐘顛倒混勻1次）
磁珠分離：將離心管置于磁力架上，靜置1-2分鐘至磁珠完全吸附，小心吸棄上清液（避免觸碰磁珠）
洗滌純化：
取下離心管，加入500μL漂洗液1，振蕩混勻1分鐘，再次置于磁力架上分離磁珠，吸棄上清
重復上述操作1次
加入500μL漂洗液2，振蕩混勻1分鐘，置于磁力架上分離磁珠，吸棄上清
重復上述操作1次
干燥磁珠：保持離心管在磁力架上，室溫晾干5-10分鐘（確保乙醇完全揮發(fā)，避免過度干燥）
核酸洗脫：加入100-200μL洗脫緩沖液，振蕩混勻后56℃孵育5分鐘，置于磁力架上分離磁珠，上清液即為提取的核酸
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注意事項
實驗操作需在潔凈環(huán)境中進行，佩戴手套、口罩，避免樣本交叉污染
蛋白酶K需-20℃保存，使用時避免反復凍融，可分裝后使用
還原劑需現用現加，避免長時間暴露于空氣中失效
若毛囊樣本角質化嚴重，可適當延長孵育時間或增加還原劑用量
提取的DNA可置于-20℃長期保存，短期可在4℃儲存
若需提高DNA產量，可將洗脫液重復洗脫一次吸附柱
關鍵字： Taq DNA連接酶;Taq DNA Ligase;
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