基本信息?
產品名稱 | 9N 2.0 DNA連接酶 | 貨號 | P-PR1329 |
規(guī)格 | 2000U、20KU | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：9N 2.0 DNA Ligase
作用機制：一種高效的T4 DNA連接酶突變體，具有更強的連接活性與熱穩(wěn)定性；可催化DNA分子之間的磷酸二酯鍵形成，實現(xiàn)平末端、粘末端DNA的連接，以及DNA與RNA的連接。
適用樣本：DNA片段的連接、載體構建、基因克隆等實驗，尤其適用于困難連接反應。
產品概述
9N 2.0 DNA連接酶是一種新型的DNA連接酶，具有獨特的連接特性與高效的連接能力。它可能是經過基因工程改造的連接酶變體，相比傳統(tǒng)的T4 DNA連接酶，在某些方面具有優(yōu)勢，如連接平末端的效率更高、反應速度更快、對不同類型DNA末端的兼容性更好等。9N 2.0 DNA連接酶能夠催化雙鏈DNA片段末端的磷酸二酯鍵形成，可連接互補的粘性末端、平末端甚至是部分不匹配的末端。它適用于多種分子克隆場景，如基因克隆、載體構建、DNA片段拼接、文庫構建等。該酶反應條件溫和，通常在室溫或37℃條件下即可高效進行連接反應，為分子克隆實驗提供了一種高效可靠的新選擇。
產品特點
新型連接酶技術：經過基因工程改造，連接平末端DNA的效率比T4連接酶高5-10倍。
快速連接反應：25℃孵育30分鐘即可完成連接，比常規(guī)T4連接酶反應時間縮短75%。
高穩(wěn)定性：-20℃保存2年以上活性無明顯下降，反復凍融不影響酶活性。
廣譜兼容性：可連接粘性末端、平末端、切口DNA，適配各類分子克隆操作。
操作步驟
一、實驗前準備
向漂洗液1中加入60mL無水乙醇，向漂洗液2中加入45mL無水乙醇，充分混勻后標記
載體RNA溶液配制：向300μg載體RNA凍干粉中加入300μL無酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分裝后-20℃保存
將冷凍樣本置于室溫解凍，輕輕顛倒混勻后備用
二、手工提取流程
樣本裂解：取200μL血液樣本至1.5mL離心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解緩沖液，振蕩混勻10秒，室溫孵育10分鐘（每3分鐘顛倒混勻1次）
磁珠結合：加入15μL磁珠懸浮液（使用前充分振蕩混勻），振蕩混勻10秒，室溫孵育10分鐘（每3分鐘顛倒混勻1次）
磁珠分離：將離心管置于磁力架上，靜置1-2分鐘至磁珠完全吸附，小心吸棄上清液（避免觸碰磁珠）
洗滌純化：
取下離心管，加入500μL漂洗液1，振蕩混勻1分鐘，再次置于磁力架上分離磁珠，吸棄上清
重復上述操作1次
加入500μL漂洗液2，振蕩混勻1分鐘，置于磁力架上分離磁珠，吸棄上清
重復上述操作1次
干燥磁珠：保持離心管在磁力架上，室溫晾干5-10分鐘（確保乙醇完全揮發(fā)，避免過度干燥）
核酸洗脫：加入100-200μL洗脫緩沖液，振蕩混勻后56℃孵育5分鐘，置于磁力架上分離磁珠，上清液即為提取的核酸
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注意事項
實驗操作需在潔凈環(huán)境中進行，佩戴手套、口罩，避免樣本交叉污染
蛋白酶K需-20℃保存，使用時避免反復凍融，可分裝后使用
還原劑需現(xiàn)用現(xiàn)加，避免長時間暴露于空氣中失效
若毛囊樣本角質化嚴重，可適當延長孵育時間或增加還原劑用量
提取的DNA可置于-20℃長期保存，短期可在4℃儲存
若需提高DNA產量，可將洗脫液重復洗脫一次吸附柱
關鍵字： 9N 2.0 DNA連接酶;9N 2.0 DNA Ligase;
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