基本信息?
產(chǎn)品名稱 | 組織細(xì)胞microRNA提取試劑盒 | 貨號 | P-PR1315 |
規(guī)格 | 25T、100T | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：Tissue/Cell microRNA Extraction Kit
作用機(jī)制：采用特殊的裂解液，破碎組織或細(xì)胞樣本，釋放microRNA；結(jié)合硅膠膜或磁珠吸附技術(shù)純化microRNA，去除樣本中的基因組DNA、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；試劑盒含RNase抑制劑，可有效防止microRNA降解。
適用樣本：新鮮或凍存的組織樣本、培養(yǎng)細(xì)胞中的microRNA提取，適用于基因表達(dá)分析、疾病診斷、基因調(diào)控研究等實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品概述
組織細(xì)胞microRNA提取試劑盒是一款用于從組織或細(xì)胞樣本中提取microRNA（miRNA）的專用試劑盒。miRNA在組織細(xì)胞中參與基因表達(dá)調(diào)控，對細(xì)胞的生長、分化、凋亡等生物學(xué)過程具有重要作用。組織細(xì)胞樣本中含有大量的mRNA、rRNA、蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)會干擾miRNA的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。該試劑盒針對組織細(xì)胞樣本的特性，優(yōu)化了裂解與純化體系，采用了特異性的miRNA吸附材料與有效的雜質(zhì)去除試劑，可高效裂解組織細(xì)胞，釋放miRNA，同時(shí)去除雜質(zhì)對miRNA的影響，保護(hù)miRNA不被降解。它通常包含裂解液、結(jié)合緩沖液、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液及miRNA特異性吸附柱等組分，操作流程簡便，提取的miRNA純度高、完整性好，可直接用于qPCR、Northern Blot、miRNA測序、miRNA芯片分析等實(shí)驗(yàn)，為組織細(xì)胞中miRNA的功能研究、基因表達(dá)調(diào)控分析、疾病機(jī)制研究等提供了重要的工具。
產(chǎn)品特點(diǎn)
組織細(xì)胞專用：針對組織細(xì)胞樣本中miRNA含量低、雜質(zhì)多的特點(diǎn)優(yōu)化，提取效率高。
miRNA完整性好：采用溫和裂解技術(shù)，有效保護(hù)miRNA不被降解，提取的miRNA完整性高。
純度達(dá)標(biāo)：去除了蛋白質(zhì)、DNA、多糖等雜質(zhì)，提取的miRNA純度高，適合下游實(shí)驗(yàn)。
樣本用量少：僅需10mg組織或1×10?細(xì)胞即可獲得足夠的miRNA用于下游實(shí)驗(yàn)。
操作簡便：離心柱式操作，無需酚氯仿抽提，實(shí)驗(yàn)流程標(biāo)準(zhǔn)化。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
試劑與耗材檢查：確認(rèn)PCR預(yù)混液、上下游引物、模板DNA、無酶水等試劑在有效期內(nèi)，外觀無渾濁、沉淀；PCR管、槍頭需為無酶無菌規(guī)格。
儀器預(yù)熱：提前10-15分鐘啟動PCR儀，設(shè)置好反應(yīng)程序，確保儀器達(dá)到預(yù)設(shè)溫度。
環(huán)境準(zhǔn)備：在超凈工作臺內(nèi)操作，佩戴無粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭臺面和移液器。
反應(yīng)體系配制
冰上操作：將所有試劑放置于冰盒內(nèi)，避免酶失活。
體系配比（以25μL體系為例）：
PCR預(yù)混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL
上游引物（10μM）：1μL
下游引物（10μM）：1μL
模板DNA：1-5μL（根據(jù)模板濃度調(diào)整）
無酶水：補(bǔ)足至25μL
輕柔混勻：用移液器輕輕吹吸混合液3-5次，避免產(chǎn)生氣泡；若有氣泡可短暫離心去除。
分裝體系：將配制好的反應(yīng)液分裝至PCR管中，每管25μL，蓋緊管蓋。
PCR儀上機(jī)反應(yīng)
程序設(shè)置：根據(jù)引物Tm值和實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置三步法或兩步法程序：
預(yù)變性：95℃，3-5分鐘
循環(huán)階段：95℃變性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根據(jù)片段長度調(diào)整，1kb約1分鐘），循環(huán)25-35次
終延伸：72℃，5-10分鐘
保溫：4℃。
上機(jī)運(yùn)行：將PCR管放入PCR儀樣品槽，確保管蓋緊密貼合；啟動程序，等待反應(yīng)完成。
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注意事項(xiàng)
無菌操作：所有試劑和耗材需高壓滅菌或無菌處理，避免外源DNA污染
溫度控制：酶、dNTP等試劑需-20℃儲存，避免反復(fù)凍融
體系優(yōu)化：根據(jù)引物Tm值、模板類型調(diào)整Mg2+濃度和退火溫度
對照設(shè)置：每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對照（無模板）和陽性對照（已知陽性模板）
關(guān)鍵字： 組織細(xì)胞microRNA提取試劑盒;Tissue/Cell microRNA;
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