Mouse Interferon-γ (IFN-γ) ELISPOT Kit

組分（Materials Provided）

產(chǎn)品概述（Product Overview）

干擾素-γ（IFN-γ）是唯一的II型干擾素。這種促炎性細(xì)胞因子由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，能夠激活巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，并通過(guò)影響抗原呈遞細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞來(lái)調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。輔助T細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ是Th1型表型的標(biāo)志。因此，高水平產(chǎn)生IFN-γ通常與宿主針對(duì)細(xì)胞內(nèi)病原體的有效防御相關(guān)。小鼠IFN-γ ELISpot檢測(cè)試劑盒旨在用于單細(xì)胞水平檢測(cè)分泌小鼠IFN-γ的細(xì)胞，并可定量分析小鼠IFN-γ分泌細(xì)胞的頻率。ELISpot檢測(cè)具有高度可重復(fù)性和靈敏性，能夠檢測(cè)頻率低于十萬(wàn)分之一的應(yīng)答，且無(wú)需事先對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行體外擴(kuò)增，僅使用少量原代細(xì)胞即可適用于高通量分析。因此，ELISpot檢測(cè)是疫苗開(kāi)發(fā)、細(xì)胞因子分泌研究以及各類(lèi)臨床試驗(yàn)監(jiān)測(cè)中的有用工具。

應(yīng)用說(shuō)明（Application）

該試劑盒用于在細(xì)胞水平檢測(cè)IFN-γ。

僅限科研使用。

存儲(chǔ)（Storage）

未開(kāi)封的試劑盒應(yīng)在收到后于2℃至8℃條件下儲(chǔ)存。

有效期見(jiàn)外包裝，請(qǐng)勿使用超過(guò)有效期的試劑。

開(kāi)封后的試劑盒應(yīng)按照組分表儲(chǔ)存，有效期自開(kāi)封之日起為30天。

原理（Assay Principles）

ELISpot檢測(cè)采用定量夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）技術(shù)。該試劑盒包含預(yù)包被抗IFN-γ抗體的微孔板、陽(yáng)性刺激物、生物素標(biāo)記的抗IFN-γ抗體、鏈霉親和素-HRP、AEC底物及各種緩沖液。

您的實(shí)驗(yàn)將包括以下6個(gè)簡(jiǎn)單步驟：

a) 特異性針對(duì)小鼠IFN-γ的單克隆抗體已預(yù)先包被在聚偏二氟乙烯（PVDF）膜底的微孔板上。

b) 將經(jīng)過(guò)適當(dāng)刺激的細(xì)胞加入孔中，并將微孔板置于37°C、濕潤(rùn)的CO2培養(yǎng)箱中孵育指定時(shí)間。在此孵育期間，分泌細(xì)胞附近固定的抗體結(jié)合了所分泌的IFN-γ。

c) 洗去細(xì)胞和未結(jié)合的物質(zhì)后，加入生物素標(biāo)記的小鼠IFN-γ特異性抗體。洗滌去除未結(jié)合的生物素化抗體后，再加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的鏈霉親和素。

d) 洗滌孔板，加入用稀釋緩沖液稀釋后的鏈霉親和素-HRP。

e) 洗滌孔板，加入AEC底物。在細(xì)胞因子定位的位置會(huì)形成紅棕色沉淀，呈現(xiàn)為斑點(diǎn)，每個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)分泌IFN-γ的細(xì)胞。

f) 斑點(diǎn)可使用自動(dòng)化ELISpot讀數(shù)系統(tǒng)進(jìn)行計(jì)數(shù)，或使用體視顯微鏡手動(dòng)計(jì)數(shù)。