雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗，酶標(biāo)板包被抗 Flt3 捕獲抗體，樣本造血生長因子受體 Flt3 結(jié)合固相載體，HRP 標(biāo)記檢測抗體結(jié)合抗原，洗滌顯色后標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 Flt3 蛋白。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測限0.06ng/mL，精準(zhǔn)檢測大鼠Flt3微量表達(dá)水平

檢測范圍：0.1ng/mL - 85ng/mL，適配大鼠造血、腫瘤相關(guān)樣本檢測

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長130分鐘，樣本孵育70分鐘，酶孵育30分鐘，顯色15分鐘，終止5分鐘

保存條件：2 - 8℃避光冷藏保存，核心抗體試劑禁止冷凍

有效期：原裝試劑盒有效期6個月，合規(guī)儲存無活性衰減

顯色系統(tǒng)：高靈敏TMB顯色體系，低濃度檢測辨識度高

檢測波長：450nm檢測，570nm校正背景

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7點(diǎn)梯度標(biāo)準(zhǔn)濃度，四參數(shù)擬合，R2≥0.996

特異性：特異性結(jié)合大鼠Flt3蛋白，與其他酪氨酸激酶無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤5%，板間CV≤7%，重復(fù)性良好

注意事項：細(xì)胞樣本需充分裂解離心；試劑避免交叉污染；顯色時間嚴(yán)格把控，避免過顯色影響OD值準(zhǔn)確性
實驗前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫靜置 27min，濃縮洗滌液稀釋 20 倍，骨髓細(xì)胞上清室溫平衡。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：Flt3 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋配制 6 梯度標(biāo)準(zhǔn)液，空白對照孔。

加樣孵育：各孔 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品、樣本，酶結(jié)合物 50μL，37℃避光孵育 62min。

洗板操作：洗滌液浸泡 33s，拍干殘液，洗板 5 次。

底物顯色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 16min。

終止讀數(shù)：終止液混勻，9min 內(nèi)讀取 450nm 吸光值。

數(shù)據(jù)計算：標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 Flt3，檢測造血干細(xì)胞受體蛋白。