本試劑盒采用高特異性雙抗體夾心ELISA原理，酶標板微孔包被大鼠Tie-2特異性抗體，待測大鼠樣本中的Tie-2抗原與固相抗體特異性結(jié)合，經(jīng)酶標記二抗結(jié)合、底物顯色后，檢測吸光度值，結(jié)合標準曲線定量檢測大鼠Tie-2蛋白的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤16pg/mL

檢測范圍：32pg/mL - 1100pg/mL

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長160分鐘（樣本溫育100分鐘、酶二抗溫育30分鐘、顯色30分鐘）

保存條件：2-8℃避光保存，禁止冷凍，所有試劑密封存放

有效期：未開封有效期6個月，開封后1.5個月內(nèi)使用

顯色系統(tǒng)：HRP催化TMB顯色體系

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：四參數(shù)邏輯擬合，R2≥0.990

特異性：特異性結(jié)合大鼠Tie-2激酶，與其他酪氨酸激酶無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤10%

注意事項：細胞、組織樣本充分裂解；洗滌步驟充分，去除非特異性結(jié)合雜質(zhì)
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒室溫放置 36min，梯度稀釋 Tie-2 標準品，對酶標板孔位進行分組標記。

一步法直接加樣 100μL 梯度標準品與大鼠血管內(nèi)皮細胞上清樣本至對應(yīng)孔，空白孔補稀釋液。

密閉封板，37℃恒溫孵育 87min，特異性結(jié)合膜受體 Tie-2 抗原。

傾倒廢液，洗滌液浸泡每孔 43s，連續(xù)洗板 6 次，徹底清除游離雜蛋白。

檢測孔加入 HRP 標記檢測抗體 100μL，避光封板孵育 39min。

依次添加顯色 A 液、B 液各 50μL，混勻避光顯色 20min。

加入終止液終止反應(yīng)，10min 內(nèi) 450nm 酶標儀讀數(shù)，計算 Tie-2 含量。