采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，預(yù)先將抗大鼠 NAG 特異性捕獲抗體包被于固相微孔板，樣本中所含 NAG 抗原結(jié)合板上固定抗體，洗去未結(jié)合雜蛋白后加入酶標記檢測抗體形成固相抗體 - 抗原 - 酶標抗體夾心復(fù)合物，經(jīng)底物顯色反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，終止液終止顯色后酶標儀測定吸光度值，對照標準品濃度梯度擬合標準曲線，定量計算樣本內(nèi) NAG 含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度≤0.1U/L

檢測范圍：0.2U/L - 8U/L

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長120分鐘（溫育30分鐘+洗板+顯色30分鐘+終止讀數(shù)）

保存條件：試劑盒未開封2-8℃冷藏保存，嚴禁冷凍；開封后試劑2-8℃密封保存

有效期：未開封原裝試劑盒12個月

顯色系統(tǒng)：TMB雙組分顯色液，過氧化物酶催化顯色體系

檢測波長：450nm（主波長），630nm（參比波長）

標準曲線繪制：以標準品濃度為橫坐標，對應(yīng)OD值為縱坐標，采用四參數(shù)Logistic擬合繪制標準曲線，計算樣本含量

特異性：特異性識別大鼠NAG，與大鼠其他糖苷酶、同源結(jié)構(gòu)蛋白無明顯交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV≤8%，板間變異系數(shù)CV≤10%

注意事項：實驗全程避免樣本溶血、脂血，溶血樣本會干擾酶活性檢測；顯色時間需嚴格把控，避免強光直射；所有試劑使用前需平衡至室溫，洗板需徹底，避免殘留洗液影響OD值。
關(guān)鍵注意事項：

本試劑盒僅科研體外檢測，嚴禁臨床診斷使用。

全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。

移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。

孵育溫度嚴格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。

洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。

終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。

終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。

實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。

不同批次試劑盒組分不可混用。

試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴禁高溫暴曬。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒全部組分室溫放置 25min，20× 濃縮洗滌液用蒸餾水按 1:20 稀釋混勻備用，酶標板拆取所需孔條，剩余板密封 2-8℃保存。

標準品配制：取凍干 NAG 標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，梯度稀釋制備 7 個濃度標準梯度，設(shè)置空白對照孔、標準品復(fù)孔、樣本復(fù)孔。

樣本加樣：標準品孔每孔加入 50μL 梯度標準液，待測樣本孔加入 50μL 預(yù)處理血清 / 組織勻漿 / 細胞上清樣本，空白孔加 50μL 樣本稀釋液。

酶結(jié)合物孵育：全部孔每孔加入 50μL HRP 標記 NAG 檢測抗體，封板膜密封酶標板，37℃避光恒溫孵育 65min，全程避免強光直射。

洗板操作：撕掉封板膜，快速甩干孔內(nèi)液體，每孔加滿稀釋后洗滌液浸泡 35s，吸水紙徹底拍干殘留液體，重復(fù)洗板 6 次。

底物顯色：每孔依次加入 TMB 底物液 A、底物液 B 各 50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 20min，觀察標準孔出現(xiàn)清晰藍色梯度即可終止。

終止檢測計算：每孔加入 50μL 終止液混勻，10min 內(nèi)酶標儀 450nm 讀取 OD 值；以標準品濃度為橫軸、OD 值為縱軸擬合標準曲線，換算各組樣本 NAG 含量。