雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測，微孔板包被抗大鼠 α-Glu 捕獲抗體，樣本內(nèi)源 α 葡萄糖苷酶結(jié)合固定抗體，洗滌后添加 HRP 標(biāo)記抗 α-Glu 檢測抗體形成夾心結(jié)構(gòu)，底物顯色讀取 OD 值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 α-Glu 蛋白濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度≤0.2U/L

檢測范圍：0.4U/L - 12U/L

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長120分鐘（酶促溫育40分鐘+顯色30分鐘）

保存條件：2-8℃避光冷藏，酶試劑單獨存放，嚴(yán)禁冷凍結(jié)冰

有效期：未開封試劑盒12個月

顯色系統(tǒng)：特異性酶底物TMB顯色體系

檢測波長：450nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：酶活性標(biāo)準(zhǔn)梯度擬合四參數(shù)曲線，定量檢測樣本酶活性

特異性：特異性檢測大鼠α葡萄糖苷酶，與β葡萄糖苷酶無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤10%

注意事項：樣本無溶血、無高溫處理；反應(yīng)pH值穩(wěn)定，避免酸堿干擾酶活性；洗板輕柔，避免孔底損傷。
實驗前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：全部試劑室溫放置 25min，20 倍洗滌液稀釋混勻備用。

標(biāo)準(zhǔn)品配制：a-Glu 凍干標(biāo)準(zhǔn)品充分溶解，梯度稀釋制備 7 個濃度梯度。

加樣：標(biāo)準(zhǔn)孔 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)液，腎組織勻漿樣本 50μL 上樣。

酶抗體孵育：每孔 50μL HRP-a-Glu 抗體，密封 37℃避光孵育 65min。

洗板：洗滌液浸泡 35s，拍干，洗板 6 次。

顯色：底物 A、B 各 50μL，避光 37℃顯色 17min。

終止讀數(shù)：終止液搖勻，9min 內(nèi) 450nm 檢測，計算 α 葡萄糖苷酶含量。