競爭抑制 ELISA 檢測原理，微孔板包被人工合成 AcSDKP 抗原，樣本中內(nèi)源 AcSDKP 與板上固定抗原競爭結(jié)合體系內(nèi)酶標記特異性抗 AcSDKP 抗體，洗滌去除游離組分后催化底物顯色，樣本 AcSDKP 濃度越高則結(jié)合酶標抗體越少、顯色越淺，依據(jù)標準品吸光值曲線反向定量樣本中 AcSDKP 濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠N-乙?；?絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E1161 |
英文名稱 | AcSDKP ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測靈敏度≤1.5pg/mL
檢測范圍：3pg/mL - 1000pg/mL
反應時間：總反應時長150分鐘（樣本溫育60分鐘+洗板+二抗溫育30分鐘+顯色30分鐘+終止讀數(shù)）
保存條件：未開封試劑盒2-8℃避光冷藏，濃縮洗滌液常溫保存，開封后試劑密封避光2-8℃存放
有效期：原裝未拆封試劑盒12個月
顯色系統(tǒng)：TMB單組分顯色液，HRP催化顯色體系
檢測波長：450nm（主檢測波長）
標準曲線繪制：梯度標準品稀釋后檢測OD值，以濃度-OD值擬合四參數(shù)曲線，線性回歸計算樣本濃度
特異性：特異性結(jié)合大鼠AcSDKP多肽，與大鼠同源短肽、血清無關蛋白無交叉反應
重復性：板內(nèi)CV≤7%，板間CV≤9%
注意事項：樣本需新鮮采集、低溫離心分離，避免反復凍融；溫育過程需密封避光，防止液體蒸發(fā)、試劑污染；標準品需現(xiàn)配現(xiàn)用，稀釋后不可留存復用。
儲存與有效期：
未開封整套試劑盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷凍；有效期 12 個月。
開封后保存
剩余酶標板條：自封袋密封，內(nèi)置干燥劑 2～8℃避光；1 個月內(nèi)用完。
HRP 酶結(jié)合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。
濃縮洗滌液：2～30℃常溫保存，結(jié)晶溫水溶解不影響效果。
復溶后標準品：分裝 - 20℃凍存，避免反復凍融，1 個月內(nèi)使用。
過期試劑禁止使用。
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實驗操作流程：
試劑平衡：所有試劑盒試劑室溫復溫 30min，濃縮洗滌液 1:20 稀釋；標準品稀釋液、樣本稀釋液提前分裝，避免交叉污染。
標準品稀釋：凍干 AcSDKP 標準品溶解后做連續(xù)倍比稀釋，配置 6 個有效濃度梯度，單獨預留空白孔無抗原添加。
孔板加樣：標準孔加 50μL 不同濃度標準品，樣本孔添加 50μL 稀釋后待測樣本，空白孔補 50μL 純稀釋液，每個組別設置 2 組復孔減少誤差。
酶標抗體共孵育：每孔添加 50μL HRP 標記抗大鼠 AcSDKP 抗體，封膜固定，37℃避光孵育 55min，孵育期間禁止挪動酶標板。
洗板步驟：棄去孔內(nèi)反應液，加滿洗滌液靜置 30s，倒扣于吸水紙拍干，循環(huán)洗板 5 次，孔內(nèi)無肉眼可見殘留氣泡液體。
避光顯色：各孔加入等量 A、B 底物各 50μL，避光 37℃反應 12min，顯色程度隨 AcSDKP 濃度升高加深，梯度區(qū)分明顯即可停止。
終止讀數(shù)計算：加入 50μL 終止液終止酶促反應，混勻后 5min 內(nèi) 450nm 測吸光度，繪制標準曲線，計算樣本內(nèi) AcSDKP 濃度。
關鍵字： 大鼠N-乙酰基-絲氨酰-天門冬酰-賴氨酰;AcSDKP;ELISA試劑盒;
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