雙抗體夾心 ELISA 法，固相載體包被抗大鼠 P53 單克隆捕獲抗體，樣本中的 P53 蛋白特異性結(jié)合固定抗體，洗滌除去非特異性結(jié)合雜質(zhì)，再加入辣根過氧化物酶標記的抗 P53 檢測抗體構(gòu)建夾心免疫復合物，TMB 底物顯色，酶標儀讀取 OD 值，通過標準曲線換算得到樣本 P53 蛋白定量濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度≤2.0pg/mL

檢測范圍：5pg/mL - 1500pg/mL

反應時間：總反應時長180分鐘（樣本溫育90分鐘+洗板+二抗溫育30分鐘+顯色30分鐘+終止讀數(shù)）

保存條件：試劑盒2-8℃避光冷藏，禁止冷凍；抗體組分需單獨密封保存，避免光照失活

有效期：未開封試劑盒12個月

顯色系統(tǒng)：TMB底物顯色體系，酸性終止液終止反應

檢測波長：450nm，推薦600nm作為參比波長校準誤差

標準曲線繪制：采用梯度標準品濃度對應的OD均值，四參數(shù)Logistic回歸擬合標準曲線，精準計算樣本P53含量

特異性：特異性識別大鼠P53蛋白，與大鼠P21、P16等同源抑癌蛋白無交叉反應

重復性：板內(nèi)變異系數(shù)≤6%，板間變異系數(shù)≤8%

注意事項：組織樣本需充分勻漿、離心去除雜質(zhì)，避免蛋白沉淀干擾檢測；全程避免高溫、強光環(huán)境；洗板力度均勻，避免孔底殘留液體影響實驗結(jié)果。
試劑盒組成：

預包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標物

標準品 6支/套 制備標準曲線，定量檢測依據(jù)

生物素標記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標物，提供酶結(jié)合位點

辣根過氧化物酶（HRP）標記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色

底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應底物，產(chǎn)生顏色變化

終止液 1瓶 終止酶促反應，穩(wěn)定顯色結(jié)果

濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)

封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒置于室溫平衡 20min，20 倍濃縮洗滌液蒸餾水稀釋；酶標板按需拆分，未使用孔條密封冷藏。

標準品制備：P53 凍干標準品溶解后梯度稀釋，設置零濃度空白標準孔，所有標準品現(xiàn)配現(xiàn)用不可隔夜保存。

樣本上樣：標準孔添加 50μL 梯度標準溶液，組織 / 細胞上清樣本 50μL 加入對應檢測孔，空白孔添加樣本稀釋液 50μL。

酶結(jié)合物孵育：全部檢測孔加入 50μL HRP 標記 P53 抗體，封板膜密封，37℃恒溫避光孵育 60min。

洗板處理：去除孔中液體，洗滌液填滿每孔浸泡 25s，拍干，重復洗板 5 次，徹底去除未結(jié)合游離抗體。

底物顯色：每孔加 TMB A、B 液各 50μL，避光 37℃孵育 18min，低濃度標準孔淺藍色、高濃度深藍色。

終止檢測：加終止液 50μL 搖勻，8min 內(nèi) 450nm 測 OD 值，標準曲線擬合計算樣本 P53 蛋白表達量。