雙抗體夾心 ELISA 體系，微孔板固定抗大鼠 SP-R 捕獲抗體，樣本中的 SP-R 膜蛋白 / 可溶性受體與包被抗體特異性結(jié)合，洗板后加入酶標記抗 SP-R 檢測抗體形成夾心復合物，底物催化顯色，依據(jù) OD 值對照標準曲線實現(xiàn) SP-R 蛋白定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度≤2.5pg/mL

檢測范圍：6pg/mL - 2000pg/mL

反應時間：總反應時長180分鐘（樣本溫育90分鐘+二抗溫育30分鐘+顯色30分鐘）

保存條件：試劑盒整體2-8℃避光冷藏，嚴禁冷凍結(jié)冰，開封后密封防潮保存

有效期：未拆封原裝試劑盒12個月

顯色系統(tǒng)：TMB底物顯色，硫酸終止液終止顯色反應

檢測波長：450nm（主波長），630nm（參比波長）

標準曲線繪制：梯度稀釋標準品，檢測各濃度OD值，四參數(shù)Logistic擬合曲線，計算樣本受體含量

特異性：特異性識別大鼠SP-R蛋白，與其他神經(jīng)遞質(zhì)受體無交叉結(jié)合反應

重復性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤10%

注意事項：組織膜蛋白樣本提取需徹底，去除胞質(zhì)雜質(zhì)；實驗過程避免孔壁觸碰，防止包被抗體脫落；試劑平衡室溫后再使用。
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫復溫 28min，20× 洗滌液稀釋；樣本稀釋液、酶結(jié)合物常溫放置，禁止低溫直接使用。

標準品稀釋：SP-R 凍干標準品充分溶解后梯度稀釋，配置 6 組有效濃度，設置空白零孔。

樣本加樣：標準孔 50μL 梯度標準品，組織膜蛋白勻漿樣本 50μL 上樣，空白孔添加稀釋液。

共孵育反應：每孔加入 50μL HRP 標記抗 SP-R 抗體，封膜，37℃避光孵育 62min。

洗板步驟：倒掉孔內(nèi)液體，洗滌液浸泡 32s，徹底拍干，循環(huán)洗板 5 次。

避光顯色：TMB 底物 A、B 各 50μL 加入各孔，37℃避光孵育 16min。

終止檢測：終止液 50μL 混勻，6min 內(nèi) 450nm 檢測 OD 值，換算樣本 SP-R 濃度。