雙抗體夾心 ELISA 體系，固相微孔板包被抗大鼠 IFN-β 捕獲抗體，樣本 IFN-β 蛋白特異性吸附于微孔，洗滌去除雜蛋白后加入酶標(biāo)記抗 IFN-β 檢測抗體構(gòu)建夾心免疫復(fù)合物，TMB 顯色測 OD 值，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測靈敏度≤1.0pg/mL

檢測范圍：2pg/mL - 650pg/mL

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長150分鐘（60分鐘樣本溫育+30分鐘二抗溫育+30分鐘顯色）

保存條件：2-8℃避光冷藏，細(xì)胞因子試劑禁止室溫久放

有效期：未開封試劑盒12個月

顯色系統(tǒng)：高靈敏TMB顯色體系

檢測波長：450nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品梯度濃度四參數(shù)擬合曲線，定量IFN-β含量

特異性：特異性識別大鼠IFN-β，與其他干擾素、細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%

注意事項：細(xì)胞上清樣本及時分裝凍存，避免因子降解；實驗全程避光，防止試劑失活。
實驗前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫放置 26min，洗滌液 1:20 稀釋，底物避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品制備：IFN-β 標(biāo)準(zhǔn)品溶解梯度稀釋 7 個梯度，空白孔單獨設(shè)置。

加樣：標(biāo)準(zhǔn)孔 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品，病毒刺激細(xì)胞上清 50μL 加入檢測孔。

酶標(biāo)抗體孵育：每孔 50μL HRP-IFNβ 抗體，密封 37℃避光孵育 69min。

洗板：洗滌液浸泡 38s，拍干，洗板 6 次。

顯色：底物 A、B 各 50μL，避光 37℃顯色 20min。

終止讀數(shù)：終止液混勻，10min 內(nèi) 450nm 測 OD 值，計算 IFN-β 含量。