雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，微孔板固定抗大鼠 IDS 捕獲抗體，樣本中 IDS 酶蛋白結(jié)合固相抗體，洗去未結(jié)合雜質(zhì)后加入酶標(biāo)記抗 IDS 檢測(cè)抗體形成夾心復(fù)合物，TMB 顯色測(cè)定吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 IDS 蛋白濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)靈敏度≤0.3ng/mL

檢測(cè)范圍：0.6ng/mL - 60ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育90分鐘，酶標(biāo)抗體孵育60分鐘，顯色20分鐘

保存條件：試劑盒2-8℃冷藏保存，禁止冷凍，試劑開(kāi)封后密封防潮

有效期：未開(kāi)封有效期6個(gè)月

顯色系統(tǒng)：高穩(wěn)定性TMB顯色系統(tǒng)，顯色均勻，背景值低

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm檢測(cè)，630nm校正背景干擾

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，四參數(shù)擬合繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本酶含量

特異性：特異性結(jié)合大鼠IDS，與其他糖酯酶、水解酶無(wú)交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)≤8%，板間變異系數(shù)≤10%

注意事項(xiàng)：1. 組織勻漿樣本需充分離心去除雜質(zhì)；2. 試劑恢復(fù)室溫后混勻再使用；3. 嚴(yán)格控制孵育溫度與時(shí)間，保證反應(yīng)充分；4. 避免試劑交叉污染。
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫平衡 21min，20 倍洗滌液稀釋混勻，按需拆分酶標(biāo)板。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：IDS 凍干標(biāo)準(zhǔn)品溶解配置 6 組梯度，空白對(duì)照孔設(shè)置。

樣本上樣：標(biāo)準(zhǔn)孔 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)液，肝腎組織勻漿樣本 50μL 上樣。

孵育反應(yīng)：每孔 50μL HRP 標(biāo)記 IDS 抗體，封膜 37℃避光孵育 56min。

洗板：洗滌液浸泡 29s，拍干，洗板 5 次。

顯色：TMB 底物各 50μL，避光 37℃反應(yīng) 13min。

終止檢測(cè)：終止液混勻，6min 內(nèi) 450nm 讀數(shù)，計(jì)算 IDS 酶含量。