本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測原理，酶標板微孔包被大鼠己糖激酶（HK）特異性抗體，可特異性捕獲樣本中的HK蛋白抗原。通過樣本孵育、特異性結(jié)合、洗板除雜、酶標抗體結(jié)合等步驟后，加入TMB底物進行顯色反應(yīng)，辣根過氧化物酶催化底物顯色，終止反應(yīng)后檢測吸光度。樣本吸光度數(shù)值與HK濃度呈正相關(guān)，對照標準曲線即可精準定量大鼠樣本中己糖激酶的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤0.15U/L

檢測范圍：0.3U/L - 25U/L

反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長140min（酶特異性孵育110min、顯色30min）

保存條件：2-8℃避光保存，酶類試劑禁止劇烈震蕩，防止酶失活

有效期：未開封12個月

顯色系統(tǒng)：適配酶活檢測的優(yōu)化TMB顯色系統(tǒng)

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：酶標準品梯度稀釋，檢測OD值，四參數(shù)擬合定量曲線

特異性：特異性識別大鼠己糖激酶，與其他糖代謝激酶無交叉反應(yīng)

重復性：板內(nèi)CV≤9%，板間CV≤11%

注意事項：樣本需低溫采集、快速處理，避免己糖激酶活性降解
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑常溫放置 34min，配制洗滌工作液，稀釋 HK 凍干標準品，取用酶標板所需條帶。

標準孔梯度加標品 50μL，樣本孔加入稀釋后組織 / 細胞裂解樣本 50μL，空白孔補稀釋液。

每孔添加酶偶聯(lián)試劑 100μL，封板膜密封，37℃孵育 70min。

洗板 5 次，洗液浸泡 34s 每次，棄液后充分拍干微孔。

避光加顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光顯色 18min。

滴入終止液 50μL 混勻終止顯色。

450nm 檢測 OD 值，計算樣本己糖激酶 HK 濃度。